食用油中转基因成分CaMV35S的恒温检测方法和检测试剂盒

摘要

本发明公开了食用油中转基因成分CaMV35S的恒温检测方法和检测试剂盒。该方法可稳定从植物油中提取核酸成分，并采用恒温扩增的方法在短时间内实现对转基因成分的检测，所述方法包括如下步骤：1）提取待检样品DNA；2）待检样品DNA在引物、Bst DNA 聚合酶存在的条件下进行恒温扩增反应；3）根据扩增结果判断待检样品中是否存在CaMV35S转基因成分。该方法具有快速高效、操作简便、高特异性、高灵敏度、鉴定简便、适合现场检测等特点，能快速检测食用油中转基因成分CaMV35S。

主权项

一种食用油中转基因成分CaMV35S的恒温检测方法，包括如下步骤：（1）根据CaMV35S启动子基因序列设计特异性恒温扩增检测引物；（2）提取待检样品DNA；（3）待检样品DNA在上述引物、Bst DNA 聚合酶存在的条件下进行恒温扩增反应；（4）根据扩增结果判断待检样品中是否存在CaMV35S转基因成分；其特征在于，所述恒温扩增检测引物的序列分别如下所示：35S‑ F3：GGTGGCTCCTACAAATGC（SEQ ID NO:1），35S‑ B3：GTCTTGCGAAGGATAGTGG（SEQ ID NO:2），35S‑FIP：GTCCATCTTTGGGACCACTGTCCATCATTGCGATAAAGGAAAGG（SEQ ID NO:3），35S‑BIP：  CACGAGGAGCATCGTGGAAACGTCAGTGGAGATATCACATC（SEQ ID NO:4），35S‑FLP：AGAGGCATCTTCAACGATGG（SEQ ID NO:5），35S‑BLP：AGAAGACGTTCCAACCACG（SEQ ID NO:6），步骤（2）提取待检样品DNA的具体步骤为：1）取一定样品油，加入1～3倍体积的正己烷和0.1～0.3倍体积的TE，20～25℃环境条件下，混合均匀；2）静置分层后，去除上层油相；3）将下层的TE水相转移到离心管；依次加入1～2 µg 鲑鱼精DNA，0.5～0.7倍体积预冷的异丙醇，0.1～0.2倍体积的3 mol/L的乙酸钠；轻轻来回颠倒混匀后置于－20℃以下沉淀DNA；4）沉淀过夜后离心，弃上清液，用预冷的65～75%的乙醇洗涤沉淀，转移到离心管，离心；5）空干DNA，加入TE溶解DNA，置于－20℃以下保存。