重组人白细胞介素-1受体拮抗剂的纯化方法

摘要

本发明提供一种重组人白细胞介素-1受体拮抗剂的纯化方法，属于生物制药技术领域。纯化方法包括以下步骤：S01预处理：对菌液进行离心处理得到菌体；S02均质处理：将菌体加入高压均质机充分破碎，获得均质液；S03纯化处理，具体包括：S03-1配制第一缓冲液和第二缓冲液；S03-2用第一缓冲液和第二缓冲液平衡层析柱；S03-3将均质液上样；S03-4洗脱目的蛋白得到重组人白细胞介素-1受体拮抗剂。本发明提供的纯化方法，使重组人白细胞介素-1受体拮抗剂活性损失降低，提高回收率。

主权项

一种重组人白细胞介素‑1受体拮抗剂的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：S01预处理：利用发酵罐获得菌液，对菌液进行离心处理得到菌体；S02均质处理：将所述菌体加入均质机充分破碎10min，加10‑30倍的去离子水，均质压力为60‑200MPa，均质次数为1‑3次，获得均质液；S03纯化处理，具体包括：S03‑1配制第一缓冲液和第二缓冲液：第一缓冲液为含10mM NaCl的50mM Tris‑HCl，pH为7.8；第二缓冲液为100mM NaCl的50mM Tris‑HCl，pH为7.8；S03‑2准备层析柱：层析柱床高度为15cm，层析柱使用前先以蒸馏水冲洗1CV，再以第一缓冲液冲洗2CV，然后以第二缓冲液清洗5CV，最后以第一缓冲液冲洗5CV，流速为120cm/h；S03‑3上样：将均质液调制为蛋白浓度约为15mg/mL，上样于层析柱上，流速120cm/h，上样体积不超过1.3CV；S03‑4洗脱：上样完毕后，以第一缓冲液冲洗层析柱至基线平稳，以20mM PB，pH为6.8，清洗2CV，再以含100mMNaCl的20mM PB，pH为6.8为洗脱液洗脱目的蛋白，流速为120cm/h，收集洗脱组分得到重组人白细胞介素‑1受体拮抗剂。