一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测试剂盒，试剂盒中包括用于扩增美洲型株猪繁殖与呼吸综合征病毒和欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因的两对引物，并提供了检测试剂盒的使用方法。本发明的有益效果为：本发明提供的猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测试剂盒，较经典的病毒分离、单RT-PCR和血清型分型方法快捷，可以方便地一次性鉴定并区分出属于欧洲型和美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒中的任意一种，以便于对疫病情况及区域、环境做出及时快捷的反应，以最短的时间做出正确的处理办法，同时，本发明采取的提取全基因组RNA提取的Trizol法具有快速、简单、成本低和所需试剂少的特点，特别适于小样品的提取，具有广泛的市场应用前景。

主权项

一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括有混合酶Enzyme Mix、2×Buffer、无菌双蒸水和两对引物，两对引物分别为用于扩增美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因的引物对一和用于扩增欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的目的基因的引物对二；所述引物对一包括上游引物：5′‑CACCACGTCGAAAGTGCCGC‑3′和下游引物：5′‑GACGCCGGACGACAAATGCG‑3′；所述引物对二包括上游引物：5′‑GGGGCTGTTGCACATCCTAA‑3′和下游引物：5′‑ACAAAAGGGCAACAACAGCC‑3′；所述混合酶Enzyme Mix为2μl，2×Buffer为25μl，无菌双蒸水为50μl；所述2×Buffer由Tris‑盐酸、氯化钾、硫酸镁、硫酸铵、吐温‑20和三磷酸脱氧核苷酸dNTPS组成。