一种利用固定化酶提取肝素钠的方法

摘要

本发明提供一种利用固定化酶提取肝素钠的方法，包括如下步骤：先将蛋白酶在pH为7.5-8.5磷酸盐缓冲液存在下加入二氧化硅吸附剂进行吸附处理，离心后得固定化酶沉淀物；将匀浆处理后的小肠黏膜在pH8-9硼酸缓冲液存在下采用所述固定化酶进行酶解处理，过滤，取滤液，所述滤液进行离心处理，分离得酶解液和沉淀物；最后对所述酶解液进行纯化处理。本发明由于在固定化酶处理中蛋白酶不参加化学反应，使蛋白酶整体结构保持不变，酶的催化活性得到很好保留。而且采用本发明酶解处理后，蛋白酶无需作为杂质去除，有效降低了粗品肝素钠中蛋白质的含量，从而提高了肝素钠的纯度。

主权项

一种利用固定化酶提取肝素钠的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)制备固定化酶先将蛋白酶在pH为7.5‑8.5磷酸盐缓冲液存在下加入二氧化硅吸附剂进行吸附处理，离心后得固定化酶沉淀物，所述蛋白酶与所述二氧化硅吸附剂的重量比为1：20‑50；所述蛋白酶与磷酸盐缓冲液的量比为1：400‑600(g/ml)，所述吸附处理是在常温下进行，搅拌处理2‑6小时，搅拌速度200‑500转/分钟；所述离心的条件为：常温下4000‑8000转/分钟离心处理5‑15分钟；2)采用固定化酶对小肠黏膜进行酶解将匀浆处理后的小肠黏膜先在pH 8‑9硼酸缓冲液存在下采用所述固定化酶进行酶解处理，所述匀浆处理是在常温下，将洗净的小肠黏膜于小肠黏膜的1‑3倍重量的蒸馏水中，在6000‑12000转/分钟下处理2‑5分钟；所述硼酸缓冲液的组分为：硼砂含量为5.721‑15.256g/L，硼酸含量为2.474‑8.659g/L，其余为水，所述固定化酶与所述小肠黏膜的重量比为1：10‑20，所述酶解的条件为20‑60℃下酶解处理2‑5小时，过滤，取滤液，所述滤液进行离心处理，分离得酶解液和沉淀物；3)提纯处理所述酶解液进行纯化处理。