一种诊断卵巢癌的磁性纳米探针的制备方法

摘要

本发明公开了一种诊断卵巢癌的磁性纳米探针的制备方法，步骤如下：（1）磁性纳米粒子的制备与表征；（2）磁性纳米粒子的硅烷化及氨基化修饰与表征；（3）采用氨基硅烷化的磁性纳米粒子，经戊二醛活化后，与CA125单抗交联制备卵巢癌磁性纳米探针。同时，本发明还公开了一种诊断卵巢癌的检测方法。本发明制备的磁性纳米探针，磁性粒子体积小可吸附更多抗原或抗体，因磁性微粒子核心为铁，在磁场中下沉速度快，易进行洗涤和固相载体分离；可特异性的捕获早期卵巢癌患者外周血中的CA125，采用酶联免疫吸附法（ELISA）对富集后的样品进行检测，构建一种基于纳米探针在卵巢癌预警及早期诊断的方法。

主权项

一种诊断卵巢癌的磁性纳米探针的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）在碱性条件下，采用共沉淀法制备了磁性纳米粒子，并利用柠檬酸钠对其进行修饰，将修饰后的磁性纳米粒子与硅烷偶联剂TEOS反应，制备得到硅烷化Fe₃O₄磁性纳米粒子；所述将修饰后的磁性纳米粒子与硅烷偶联剂TEOS反应，制备得到硅烷化Fe₃O₄磁性纳米粒子的具体方法如下：将2 mlFe₃O₄的乙醇溶液加入至50 ml乙醇‑水混合溶剂中，其中，乙醇:水=4:1，然后加入1 ml氨水，超声20 min使其充分分散；接着200 μl TEOS缓缓加入至反应溶液中，在磁力搅拌下反应6 h，600 r/min；最后，将制备的硅烷化Fe₃O₄磁性纳米粒子用无水乙醇清洗3次；（2）将硅烷化Fe₃O₄磁性纳米粒子与氨基硅烷化试剂APTES反应，制备得到氨基硅烷化修饰的磁性纳米粒子，使硅烷化Fe₃O₄磁性纳米粒子表面带有活性较强的氨基功能基团；其具体制备方法如下：将制备的硅烷化四氧化三铁磁性纳米粒子用无水甲苯清洗3次，加入30 ml无水甲苯、1 ml APTES，超声20 min后，在磁力搅拌器上进行反应，条件为在105 ℃下回流反应8 h；最后，利用外加磁场，将氨基硅烷化的磁性四氧化三铁纳米粒子从甲苯溶液中分离出来，并用乙醇溶液对其清洗5次；（3）氨基硅烷化修饰的磁性纳米粒子经戊二醛活化后，与CA125单抗交联制备磁性纳米探针；其具体制备方法如下：在修饰完APTES之后，将2 ml 10mM氨基化的磁性纳米粒子用pH=7.4的PBS溶液充分清洗3次，分散在质量分数为10 %戊二醛的PBS溶液中，并在室温下充分震荡并保持在分散状态，反应3 h，然后磁性纳米粒子采用外加磁场进行磁分离，再用PBS溶液洗3 次；将活化后的氨基化磁性粒子悬浮在0.5 ml PBS溶液中，加入不同浓度CA125单抗，4℃反应42 h，最后采用外加磁场进行磁性分离，最终获得CA125抗体复合磁性纳米探针。