包合物包合率测定仪的测定方法

摘要

一种包合物包合率测定仪的测定方法，所采用的测定仪包括检测部分(1)、控制部分(2)和显示部分(3)，检测部分(1)包括样品管(11)、第一透镜(12)、短波通滤光片(13)、第二透镜(14)、激发光源(15)、第三透镜(16)、长波通滤光片(17)、第四透镜(18)和光电倍增管(19)；控制部分(2)主要为芯片；显示部分(3)为液晶显示屏.采用本装置测定包合物包合率的方法按五个步骤进行：一是备料，二是溶液的制备，三是仪器校正，四是荧光强度-包合率标准曲线的建立，五是样品包合率的测定.本发明独创了无光谱特征的包合物采用荧光法测定的新途径，且所改进的仪器灵敏度高，样品量低，操作简单，应用范围广。

主权项

一种包合物包合率测定仪的测定方法，其特征是按如下步骤进行：(1) 备料：市购或网购足量的三羟甲基氨基甲烷粉剂、质量浓度为37%的浓盐酸、蛋白粉、无水乙醇；按实验设计要求向有关企业订购梯度系列齐全的不同包合率的固态β‑环糊精‑药物包合物标准品；(2) 溶液的制备：① 取6.59 g 三羟甲基氨基甲烷和7.83 mL 浓盐酸，用蒸馏水配制成1000 mL 浓度为0.1 mol·L^‑1 pH=7.43的三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液;② 以三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲溶液为溶剂，以蛋白粉为溶质，配制浓度为1.0×10^‑5 mol·L^‑1的蛋白标准溶液；③ 以无水乙醇为溶剂，以不同包合率的固态β‑环糊精‑药物包合物标准品为溶质，配制不同包合率的β‑环糊精‑药物包合物系列标准溶液，浓度均为1.0×10^‑3 mol·L^‑1；(3) 仪器校正：取25 μL已知包合率的包合物标准溶液注入含2.5 mL蛋白标准溶液的样品管中，打开激发光源并将光引入样品管中，激发样品管中被测分子中的电子并导致发出荧光，此荧光经光电倍增管将光信号转化为电信号，经芯片计算出样品的包合率，通过比较当前的包合率与计算出的包合率，进行仪器校正；(4) 荧光强度‑包合率标准曲线的建立：将25 μL不同包合率的β‑环糊精‑药物包合物标准溶液逐一注入含2.5 mL蛋白标准溶液的样品管中，分别检测其荧光发射强度，此荧光强度经芯片拟合后得到以荧光强度为纵坐标，包合物的包合率为横坐标的荧光强度‑包合率标准曲线；(5) 样品包合率的测定：将25 μL待测样品注入含2.5 mL蛋白标准溶液的样品管中，检测其荧光发射强度，此荧光强度经过芯片代入已拟合的荧光强度‑包合率标准曲线中，得到对应的包合率即为该样品的包合率。