一种生产苦杏氰甙作为杀虫剂的方法

摘要

本发明公开了一种生产苦杏氰甙作为杀虫剂的方法，包括：选择增殖速度快而且细胞内氰甙含量高的苦杏胚芽细胞株作为种质和规模化生产苦杏氰甙两部分；本发明的杀虫剂属植物次生代谢物杀虫农药的优点是，具有杀虫活性,使用中对人畜比较安全，而且还兼有杀菌和刺激作物生长的作用；达到杀虫防病、增产增收的多重功效，主要用于家庭阳台种植的小花园、小菜园的病虫害防治。

主权项

一种生产苦杏氰甙作为杀虫剂的方法，其特征在于包括：选择增殖速度快而且细胞内氰甙含量高的苦杏胚芽细胞株作为种质和规模化生产苦杏氰甙两部分；其具体操作方法如下：所述的选择增殖速度快而且细胞内氰甙含量高的苦杏胚芽细胞株作为种质步骤如下：（1）取正季生长的苦杏胚芽，作为诱导愈伤组织的外植体，取苦杏胚芽后，注意保鲜和清洁；（2）苦杏胚芽表面消毒：于三角瓶中放自来水60毫升自来水和2‑3克洗衣粉，并将苦杏胚芽放入，在轻轻搅动1‑1.5分钟；用自来水龙头小水流冲洗2‑3小时后，将苦杏胚芽夹到另一个灭菌三角瓶中；倒入75%的酒精放置1分钟后，倒掉酒精；再倒入0.1%次氯酸钙12－15分钟后，倒出次氯酸钙，用灭菌水冲洗3次，再在无菌水中静泡3‑4分钟，用灭菌过的镊子将苦杏胚芽夹到吸水纸上吸干表面水，用灭菌刀将苦杏胚芽切成2毫米左右大小；（3）制作培养基：配方是在1升ＭＳ基本培养基上，加肌醇100毫克、ＶＢ1 8毫克、ＶＢ6　8毫克、ＮＡ8毫克、甘氨酸6毫克、蔗糖40克、2.4－Ｄ1.5毫克、ＮＡＡ1.5毫克、琼脂6克；搅拌均匀，为固体培养基，pH为5.8，对固体培养基进行120℃、20分钟蒸汽灭菌，形成湿度较大的无菌固体培养基；（4）诱导苦杏胚芽愈伤组织：把切好的苦杏胚芽接种在培养基，培养基分装在三角瓶中，每瓶装40毫升培养基，接种10毫克切好的苦杏胚芽；置于培养基温度27℃的条件下，诱导傅伤组织；20天后长出愈伤组织；（5）继代培养苦杏胚芽愈伤组织：将20天后长出愈伤组织，转移到上述相同的培养基上，每个三角瓶移入5－7块初始苦杏胚芽愈伤组织，在1500ＬＵＸＡ荧光灯的光培养下，每40天继代一次；（6）挑选苦杏胚芽愈伤组织：经过3－4次继代培养后的苦杏胚芽愈伤组织，用灭菌针头挑选出生长旺盛、颗粒状的苦杏胚芽愈伤组织；（7）将挑选出生长旺盛、颗粒状的苦杏胚芽愈伤组织，一部分用于继续继代培养，另一部分用于规模化生产苦杏氰甙；所述的规模化生产苦杏氰甙的操作方法如下：（1）将挑选出生长旺盛、颗粒状的苦杏胚芽愈伤组织接种在三角瓶装的液体培养基上，该培养基是在培养基配方为1升无菌水的基础上，加肌醇100毫克、ＶＢ1　8毫克、ＶＢ6　8毫克、ＮＡ8毫克、甘氨酸6毫克、蔗糖40克、2.4－Ｄ1.5毫克、ＮＡＡ1.5毫克，搅拌均匀，进行灭菌处理，而制成的液体培养基；每个为三角瓶装100毫升液体培养基，接种2克鲜重的苦杏胚芽愈伤组织；（2）将接种后的三角瓶放在往复80－90次/分钟的摇床上培养，光培养为1500ＬＵＸＡ荧光灯，温度为27℃，接种后10天为第一继代，按照1瓶扩大为10瓶的数量；要求每个三角瓶装100毫升液体培养基，接种2克左右鲜重的苦杏胚芽愈伤组织的数量，以后每7天继代一次，扩大一次，共计7次；（3）将苦杏胚芽愈伤组织返回固体培养基，经过7次继代和扩大培养后，将培养苦杏胚芽愈伤组织，放在40毫米×40毫米，高20毫米的灭菌不锈钢盘的原固体培养基上接种，固体培养基厚度在10毫米，放置黑暗条件下，培养20天；（4）培养20天后的苦杏胚芽愈伤组织和培养基，通过磁力搅拌反应器作用，分离出苦杏胚芽愈伤组织；（5）将培养的苦杏胚芽愈伤组织烘干，提取苦杏氰甙。