基于磁性分离和量子点标记的人流感嗜血杆菌快速检测方法和试剂盒

摘要

本发明提供了一种基于磁性分离和量子点标记的检测人流感嗜血杆菌抗原的方法，该方法包括（1）制备抗人流感嗜血杆菌免疫纳米磁珠；（2）制备量子点标记的抗人流感嗜血杆菌纳米探针；（3）将待检样品用PBST缓冲液溶解后，向溶解液中加入抗人流感嗜血杆菌免疫纳米磁珠，充分混合及反应后进行磁分离，以PBST缓冲液洗涤，向得到的沉淀物中加入量子点标记的抗人流感嗜血杆菌纳米探针，反应后磁分离，以PBST缓冲液洗涤后，使用荧光酶标仪检测荧光值。本发明建立了一套准确、快速、高灵敏度的检测人流感嗜血杆菌的方法，其在人流感嗜血杆菌的临床诊断、病原学鉴别、流行病学调查等方面具有很高的实用价值。

主权项

一种基于磁性分离和量子点标记的检测人流感嗜血杆菌抗原的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1)兔抗人流感嗜血杆菌膜蛋白P6多克隆抗体的制备；2)鼠抗人流感嗜血杆菌膜蛋白P6多克隆抗体的制备；3)将步骤1)制备得到的兔抗人流感嗜血杆菌膜蛋白P6多克隆抗体与纳米磁珠通过共价偶联，制备抗人流感嗜血杆菌免疫纳米磁珠；4)将步骤2)制备得到的鼠抗人流感嗜血杆菌膜蛋白P6多克隆抗体与纳米量子点通过共价偶联，制备量子点标记的抗人流感嗜血杆菌纳米探针；5)取人呼吸道分泌物样本，用PBST缓冲液溶解后，加入步骤3)制备得到的抗人流感嗜血杆菌免疫纳米磁珠，充分混合，反应10‑45min后进行磁分离，以PBST缓冲液洗涤2遍后，向磁分离得到的沉淀物中加入步骤4)制备得到的量子点标记的抗人流感嗜血杆菌纳米探针，反应10‑45min后进行磁分离，以上述PBST缓冲液洗涤2遍后，使用荧光酶标仪读取荧光值；所述PBST缓冲液中各成分含量如下：8g/L NaCL，0.2g/L KCl，0.24g/L KH₂PO₄，1.44g/L Na₂HPO₄，0.3g/L NaN₃，0.5ml/L Tween‑20；所述PBST缓冲液的pH＝7.4；6)根据步骤1)‑步骤5)的方法分别检测四份经临床确定为人流感嗜血杆菌阴性的人群的呼吸道分泌物样品，读取荧光值；所述人流感嗜血杆菌阴性的人群的呼吸道分泌物样品简称人流感嗜血杆菌阴性对照样品；所述四份人流感嗜血杆菌阴性对照样品的荧光值的平均值与3倍标准差之和即为CUT‑OFF值；若步骤5)中人呼吸道分泌物样本的检测荧光值大于CUT‑OFF值，则判断为人呼吸道分泌物样本中人流感嗜血杆菌抗原为阳性；若步骤5)中人呼吸道分泌物样本的检测荧光值小于CUT‑OFF值，则判断为人呼吸道分泌物样本中人流感嗜血杆菌抗原为阴性。