循环癌细胞之KRAS致癌基因检测方法

摘要

循环癌细胞之KRAS致癌基因检测方法，系至少包含检体前处理步骤、制备活化型KRAS检测晶片步骤、杂合反应步骤、晶片呈色步骤、以及分析判读步骤，而该活化型KRAS检测晶片系包含将22个目标基因（target gene）、一组空白对照组（Blank Control与Negative control）及一组内部对照组（Internal Control）三重复点阵于一基材上，在该基材上形成被覆有标定特定核苷酸探针序列之活化型KRAS检测晶片（Activating KRAS Chip）。藉此，利用加权型酵素晶片操作平台（WEnCA），并合并加权因素之概念算法，可用以评估标靶药物-cetuximab疗效，提供一快速、精确、灵敏、低成本、大量分析且易于自动化之WEnCA操作平台之方法，以进行快速生物检体检测分析，完成传统生医检测上所无法达成之目标者。

主权项

一种循环癌细胞之KRAS致癌基因检测方法，其至少包含下列步骤：（Ａ）检体前处理步骤：收集一待检测之检体，磁珠纯化萃取得该检体中之讯息核醣核酸（mRNA），将此mRNA经由反转录为互补去氧核醣核酸（cDNA）后，再以酵素标定成探针（Probe）；（Ｂ）制备活化型KRAS检测晶片步骤：将包含22个目标基因（target gene）、一组空白对照组（Blank Control与Negative control）及一组内部对照组（Internal Control）三重复点阵于一基材上，在该基材上形成被覆有标定特定核苷酸探针序列之活化型KRAS检测晶片（Activating KRAS Chip），其中该22个目标基因系为ATP2A2、ATP6V0B、BCL2、CALM2、CEBPB、CLSTN1、COL4A1、CXCL11、CXCR4、CYR61、DVL3、E2F4、ETS1、H2AFZ、L1CAM、LRP1、RAP1B、RPL30、SLC25A5、SPP1、TAF12及TBX19；（Ｃ）杂合反应步骤：将该探针与该活化型KRAS检测晶片进行杂合（Hybridization）反应，使该活化型KRAS检测晶片表面之标定特定核苷酸探针序列与该探针上之酵素进行杂合处理，并将未反应之探针由晶片上洗净；（Ｄ）晶片呈色步骤：将该活化型KRAS检测晶片上杂合后之探针加上呈色剂进行呈色反应（Color Development）；以及（Ｅ）分析判读步骤：撷取该活化型KRAS检测晶片呈色反应后之影像，并对呈色反应后之影像结果进行自动化分析，将分析后所得之侦测值以基因加权计算方式，依据每个基因对于疾病形成或抗药性发生之重要性给予个别加权分数（Weighted score），再经由阳性反应（Positive reaction）基因点乘上基因点之加权值而得到晶片之总分（Total Score）。