厚朴萃取之新联苯化合物及生物活性成分及制备方法

摘要

为常用中药材，临床用于改善胃肠疾病、咳嗽、松弛肌肉及镇静等。本发明系研究由厚朴树皮分离出3种新联苯化合物：5'-allyl-5-(1-hydroxyallyloxy)biphenyl-2,2'-diol(1),5,5'-diallyl-2-(allyloxy)biphenyl-2'-ol(2)及5,5'-diallyl-2-(3-methylbut-2-enyloxy)biphenyl-2'-ol(3)，以及12个已知化合物(4-15)。这些化合物经各种实验数据分析(包括2D-NMR：NOESY,COSY,HMBC,HSQC...等)以及比对相关文献上之数据，而确认其结构。上述分离之化合物，藉由抑制formyl-L-methionyl-L-leucyl-L-phenylalanine/cytochalasin B(fMLP/CB)所诱导人类嗜中性白血球产生超氧阴离子(O2-)及弹性蛋白酶(elastase)之效果，来评估其抗发炎活性。抗发炎活性试验之结果显示5'-allyl-5-(1-hydroxyallyloxy)biphenyl-2,2'-diol(1),magnolol(4),honokiol(5),randainal(7),magnaldehyde D(8)，及randaiol(9)对于fMLP/CB所诱导超氧阴离子(O2-)的产生，具有良好的抑制活性(IC504.42μg/mL)。另外，5'-allyl-5-(1-hydroxyallyloxy)biphenyl-2,2'-diol(1),magnolol(4),
randainal(7),magnaldehyde D(8)，及randaiol(9)对于fMLP/CB所诱导弹性蛋白酶(elastase)的释放，具有良好的抑制作用(IC502.35μg/mL)。

主权项

一种厚朴萃取之新联苯化合物的制备方法，乃藉由下列步骤方法制备：A.将厚朴树皮切片阴乾后共得5.0kg，以甲醇冷浸抽取三次，所得之抽取液经减压浓缩后，得到MeOH浸膏510g，接着以EtOAc：H2O(1：1,v/v)进行分配，得到EtOAc层抽出液，经减压浓缩后得到EtOAc层抽出物(Fr.A,118g)，再将H2O层抽出液与n-BuOH(1：1,v/v)再进行分配，得到n-BuOH层抽出物(Fr.B,177g)及H2O层抽出物(Fr.C,206g)；B.取自步骤A之EtOAc层抽出物(Fr.A,118g)经管柱层析法分离(silica gel,70-230mesh,4.9kg)，由n-hexane开始冲湜，渐次增加EtOAc及MeOH以提高其极性，共得到10个分划：Fr.A1(2L,n-hexane),A2(7L,n-hexane/EtOAc,30：1),A3(7L,n-hexane/EtOAc,20：1),A4(6L,n-hexane/EtOAc,10：1),A5(5L,n-hexane/EtOAc,5：1),A6(6L,n-hexane/EtOAc,3：1),A7(5L,n-hexane/EtOAc,2：1),A8(6L,n-hexane/EtOAc,1：1),A9(6L,EtOAc),A10(6L,MeOH)；C.取自步骤B之Fraction A2(11.2g)经管柱层析法分离(silica gel,230-400mesh,505g)，以n-hexane/acetone(40：1)进行冲湜，得到16个分划(each 1.0L,Fr.A2-1~A2-16)，Fr A2-4(150mg)经preparative TLC(silica gel,CHCl3/EtOAc,60：1)精制纯化，得到randaiol(9)(3.8mg,Rf=0.55)，Fr A2-6(165mg)经preparative TLC(silica gel,n-hexane/acetone,5：1)精制纯化，得到5,5'-diallyl-2-(allyloxy)biphenyl-2'-ol(2)(4.2mg,Rf=0.55)，取A2-9
(185mg)以preparative TLC(silica gel,n-hexane/acetone,10：1)精制纯化，得到5,5'-diallyl-2-(3-methylbut-2-enyloxy)biphenyl-2'-ol(3)(4.5mg)(Rf=0.60)，取A2-11(145mg)以preparative TLC(silica gel,n-hexane/acetone,5：1)精制纯化，得到5'-allyl-5-(1-hydroxyallyloxy)biphenyl-2,2'-diol(1)(3.7mg)(Rf=0.36)；D.取自步骤B之Fraction A3(10.5g)经管柱层析法分离(silica gel,230-400mesh,475g)，以n-hexane/acetone(3：1)进行冲湜，得到13个分划(each 1.2L,Fr.A3-1~A3-13)，Fr A3-6(272mg)以n-hexane洗涤过滤后，以CH2Cl2再结晶得到magnolol(4)(95mg)；E.取自步骤B之Fraction A4(9.5g)经管柱层析法分离(silica gel,230-400mesh,420g)，以n-hexane/acetone(3：1)进行冲湜，得到11个分划(each 1.0L,Fr.A4-1~A4-11)，取Fr.A4-5(145mg)以preparative TLC(silica gel,CHCl3/MeOH,25：1)精制纯化，得到randainal(7)(4.6mg)(Rf=0.26)，取Fr.A4-6(138mg)以preparative TLC(silica gel,CHCl3/MeOH,25：1)精制纯化，得到magnaldehyde D(8)(3.8mg)(Rf=0.24)，取Fr.A4-7(220mg)以preparative TLC(silica gel,n-hexane/acetone,3：1)精制纯化，得到honokiol(5)(90mg)(Rf=0.36)。