一种双抗体单通道乙脑抗原免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种双抗体单通道乙脑抗原免疫传感器的制备方法及应用，属于新型功能材料，新型传感器构建技术领域。基于抗原抗体之间良好的特异性，该传感器利用人免疫球蛋白免疫对的夹心结构来增大乙脑抗原检测范围，显著提高了传感器的灵敏度，降低了传感器的检出限，对乙型脑炎肿瘤的早期诊断具有重要的意义。

主权项

一种双抗体单通道乙脑抗原免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）改性巯基化石墨烯的制备在磁力搅拌下，将0.1 ~ 0.2 g的氧化石墨烯GO分散于10~20 mL 超纯水中，制得GO水溶液，将0.3 mL的3‑巯丙基三乙氧基硅烷MPTES加入到GO水溶液中，超声2 ~ 5 h，在磁力搅拌下，将GO溶液加热到70℃并保温2 ~ 4 h，加入0.1 ~ 0.3 mL、体积分数为80%水合肼，在95℃下保温2 ~ 4 h，离心、真空干燥，制得改性巯基化石墨烯；（2）金纳米溶液Au的制备在磁力搅拌下，将1 mL、质量分数为1%的氯金酸加入到100 mL的超纯水中，并加热至沸腾，将2.5 ~ 5 mL、质量分数为1%的柠檬酸钠加入到氯金酸溶液中，继续加热15 ~ 30 min至溶液变红，冷却，制得金纳米溶液Au；（3）Au@GS分散液的制备将1 mg的GS加入到60 ~ 90 mL的金纳米溶液Au中，强力搅拌20 ~ 60 min，离心分离即得Au@GS；（4）Pd二十面体的制备将0.666 g PVP和0.3 ~ 0.4 mL、1 mol/L的NaCl溶液加入到30 mL的乙二醇溶液中，加入0.25 ~ 0.35 mL、0.5 mol/L的氯钯酸钠溶液，强磁力搅拌30 ~ 60 min，将所得氯钯酸钠混合溶液于120℃下强力搅拌48 ~ 72 h，用丙酮离心洗涤5 ~ 8次，鼓风干燥，制得钯二十面体；（5）双抗体孵化物Ab(H)@Ab(E)@Pd溶液的制备将0.1 ~ 0.2 mg的Pd二十面体分散于2 mL超纯水中，得到Pd二十面体溶液，将20 ~ 30 µL、100 µg/mL的人免疫球蛋白抗体Ab(H)标准溶液和80 ~100 µL、100 µg/mL的乙脑抗体Ab(E)溶液加入到Pd二十面体溶液中，于4℃震荡孵化器中孵化24 h；加入10 ~ 100 µL、1.0 mg/mL的BSA，在4℃震荡孵化器中孵化24 h，制得双抗体孵化物Ab(H)@Ab(E)@Pd溶液；（6）双抗体单通道乙脑抗原免疫传感器的制备a 用Al₂O₃抛光粉打磨直径为4 mm的玻碳电极，超纯水清洗干净；将6 µL、1.0 ~ 1.6 mg/mL 金杂化改性巯基化石墨烯Au@GS分散液滴加到电极表面，室温下晾干成膜；b 依次滴加6 µL、1~5 µg/mL的人免疫球蛋白抗体Ab(H)标准溶液，3 µL、质量分数为0.5% ~ 2%的BSA溶液，超纯水洗净，4℃冰箱中晾干；c 滴加6 µL、1 µg/mL的人免疫球蛋白抗原Ag(H)标准溶液，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；d 滴加6 µL的Ab(H)@Ab(E)@Pd双抗体孵化物溶液，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；e 滴加6 µL、0.01~5 ng/mL的一系列不同浓度的乙脑抗原Ag(E)标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干，制得一种双抗体单通道的免疫传感器。