薄层色谱法半定量测定氨基甲酸乙酯的方法

摘要

本发明提供薄层色谱法半定量测定氨基甲酸乙酯的方法。该法以肉桂醛、磷酸混合液做荧光衍生剂，以甲基叔丁基醚、石油醚、甲醇混合液为流动相展开剂，薄层色谱板为固定相，经薄层展开的氨基甲酸乙酯与荧光衍生剂反应后，结果可在普通紫外分析仪365nm,Rf值为0.85处观察到绿色荧光点，薄层板的最低载药量为50ng的氨基甲酸乙酯。如果按照酒中氨基甲酸乙酯5mg/L的限定标准，则本发明可以直接检测出2.5mg/L的EC，薄层板的点样量一般最大为20μL，方法所需样品少，快速，灵敏度高，步骤简单，所需设备少，且易于操作。可依据该法原理，研发出一种速测试剂盒，用于酒精饮料及发酵食品中氨基甲酸乙酯的快速检测。

主权项

薄层色谱法半定量测定氨基甲酸乙酯的方法，其特征在于，以肉桂醛、丙酮、磷酸混合液做荧光衍生剂，以甲基叔丁基醚、石油醚、甲醇混合液为流动相展开剂，薄层色谱板为固定相，经薄层展开的氨基甲酸乙酯与荧光衍生剂反应后，在紫外分析仪可肉眼观察到绿色的氨基甲酸乙酯荧光斑点，Rf值固定；具体步骤为：（1）取出薄层硅胶板于105℃~110℃烘箱内活化半小时，放入干燥器中备用；（2）配制展开剂，搅拌后倒入双槽薄层色谱展开缸中，静置0.5~1小时，使之饱和；所述展开剂的组成为甲基叔丁基醚、石油醚（高沸程）和甲醇；其体积比为甲基叔丁基醚：石油醚：甲醇=（3—6）:（3—10）:（1—5）；所述石油醚为高沸程石油醚；（3）配制荧光衍生剂溶液：将肉桂醛，丙酮，磷酸混合，搅拌后备用；（4）在距薄层硅胶板下端1cm处点样，于同一侧面上距薄层硅胶板上端2cm处铅笔标记作为展开前沿线，点样样品为至少含有50ng的氨基甲酸乙酯待测液；（5）在薄层展开缸中展开，展开剂到达展开前沿线后取出，晾干；（6）将晾干后的薄层板浸于荧光衍生剂中后取出，之后再在烘箱反应5—20分钟；（7）在紫外分析仪于365nm处暗环境条件下观察薄层板，此时薄层板背景颜色为蓝白色，若在点有氨基甲酸乙酯的展据范围内有清晰的绿色斑点，此斑点即是氨基甲酸乙酯衍生后的荧光斑点，若点样量中含有的氨基甲酸乙酯含量小于50ng时，斑点不可见。