一种快速鉴定绿潮浒苔类藻类的方法

摘要

本发明涉及生物检测领域，公开了对绿潮爆发主要浒苔类藻类：浒苔、扁浒苔、曲浒苔、缘管浒苔的进行鉴定的方法。用待测绿潮浒苔类藻类的总DNA为模板，进行以下荧光PCR检测：检测体系A中加入相应的特异性引物及TaqMan探针进行qPCR扩增和荧光检测；根据相应荧光信号和特异性扩增曲线，确定样品是否为扁浒苔或曲浒苔，或者是缘管浒苔和浒苔中的一种；检测体系B中加入缘管浒苔的特异性引物，用SYBR Green体系进行扩增并荧光检测；在检测体系A中鉴定为缘管浒苔或浒苔，并在检测体系B中出现特异性扩增曲线的为缘管浒苔，未出现特异性扩增曲线的为浒苔。本方法对样本低要求，高效率，精确检测，省时省力省费用，效果显著。

主权项

一种快速鉴定绿潮浒苔类藻类的方法，其特征在于，步骤包括：用待测绿潮浒苔类藻类的总DNA为模板，进行以下荧光PCR检测：检测体系A中，加入相应的特异性引物和TaqMan探针，用TaqMan体系进行PCR扩增和荧光检测；扁浒苔的特异性引物上游序列C‑its‑arms‑F如SEQ ID No.1的核苷酸所示：GGCGTCCGCCGTTTT，下游序列C‑its‑arms‑R如SEQ ID No.2的核苷酸所示：GCAGAAGGTTTCATGGGTTAGG，TaqMan探针C‑its‑arms‑p如SEQ ID No.3的核苷酸所示：CCGGTGAGGTGCGCTCCCC；曲浒苔的特异性引物上游序列F‑5s‑F如SEQ ID No.4的核苷酸所示：TCGTCCGGGTTCTCGACG，下游序列F‑5s‑R如SEQ ID No.5的核苷酸所示：CTGGCGCGAAACATGGC，TaqMan探针F‑5s‑P如SEQ ID No.6的核苷酸所示：CCTCATTCCTTCCCCATGTCGCCAA；缘管浒苔和浒苔的特异性引物上游序列P‑hsp‑F如SEQ ID No.7的核苷酸所示：CAACAACCTGCTGGGCAAGT，下游序列P‑hsp‑R如SEQ ID No.8的核苷酸所示：TCGAACACGACCTCGATTTG，TaqMan探针P‑hsp‑P如SEQ ID No.9的核苷酸所示：CGACCTCACCGGGATTCCTCCC；所述的三种TaqMan探针的5’端分别连接不同的报告染料，3’端连接淬灭基团；检测体系B中，加入缘管浒苔的特异性引物，用SYBR Green体系进行扩增，并进行荧光检测；缘管浒苔的特异性引物上游序列L‑5s‑arms‑F如SEQ ID No.10的核苷酸所示：TCCCCTGTGCTGTATCGCTAT，下游序列L‑5s‑arms‑R如SEQ ID No.11的核苷酸所示：CGGCCGCTGTAGACAGATG；在检测体系A中鉴定为缘管浒苔或浒苔的，同时在检测体系B中出现特异性扩增曲线的，为缘管浒苔；在检测体系A中鉴定为缘管浒苔或浒苔的，并在检测体系B中未出现特异性扩增曲线的，为浒苔。