一种基于乙二胺四乙酸模拟酶试剂盒的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种基于乙二胺四乙酸模拟酶试剂盒的制备方法及其应用。本发明主要是利用乙二胺四乙酸催化并分解双氧水的特性，把乙二胺四乙酸与金纳米颗粒这两种纳米材料有机的结合起来，利用乙二胺四乙酸取代酶联免疫吸附反应中的生物酶，再加上冰毒或前列腺癌抗体与冰毒抗原或前列腺癌抗原的特异性结合，形成了“三明治”的夹层结构，成功制备出检测冰毒以及前列腺癌抗原的模拟酶的超高灵敏度试剂盒，且现象明显，操作简便，灵敏度超高，能有效准确的测定出人血清中、唾液、尿液中冰毒的含量以及血清中前列腺癌抗原的浓度。

主权项

一种基于乙二胺四乙酸模拟酶试剂盒的制备方法，其特征在于包括如下顺序的步骤：(1)将冰毒抗体或者前列腺癌抗体接到96孔聚苯乙烯微孔板上，4℃下反应10小时，三次PBS缓冲溶液冲洗后，加入终止缓冲溶液即浓度为1mg/mLBSA的PBS缓冲溶液反应1小时；(2)三次PBS缓冲溶液冲洗后，再在不同微孔板中对应加入各种浓度的样品稀释液，反应1小时；所述样品稀释液为稀释成浓度为1×10^‑12至2×10^‑18mg/mL的冰毒溶液或者稀释成浓度为1×10^‑12至1×10^‑16mg/mL的前列腺癌抗原溶液；(3)三次PBS缓冲溶液冲洗后，再对应加入乙二胺四乙酸标记的冰毒抗体或者乙二胺四乙酸标记的前列腺癌抗体，反应1小时；(4)再用PBS缓冲溶液冲洗三次，然后加入柠檬酸三钠溶液以及双氧水溶液，反应40分钟后，加入氯金酸溶液；30分钟后，观察不同微孔板中溶液颜色的变化，与对比实验中生成的显色底物金纳米颗粒溶液即柠檬酸三钠溶液、双氧水溶液和氯金酸溶液所制备的金纳米颗粒溶液的颜色进行对比；并用酶标仪读取波长550nm处的吸光度值，与对比实验中生成的显色底物金纳米颗粒溶液的吸光度值进行对比，即能得到检测结果，实现冰毒以及前列腺癌抗原的快速检测。