脐带间充质干细胞体外培养和扩增方法

摘要

一种脐带间充质干细胞体外培养和扩增方法，包括脐带清洗、破碎消化、流式细胞仪分选和扩增培养等步骤。本发明提供的脐带间充质干细胞体外培养和扩增方法，特别筛选并获得CD271⁺细胞，配合使用10v/v%自体血清并加入50ng/mlHSP90培养6天后获得。验证发现，由此培养出的细胞不但具有常规间充质干细胞的表面标志，而且细胞增殖能力也强于常规方法培养出的间充质干细胞。

主权项

一种脐带间充质干细胞体外培养和扩增方法，其步骤如下：先将清洗液清洗脐带并破碎，然后加入等体积的0.05w/v％胶原酶于37℃消化后，清洗3次以上，而得脐带间充质细胞；用不含血清的α‑MEM培养基重悬细胞，加入经纯化的CD271一抗，避光孵育，之后用磷酸缓冲液清洗，继续用不含血清的α‑MEM培养基重悬细胞，加入二抗并孵育，再次用磷酸缓冲液清洗，并用不含血清的α‑MEM培养基重悬细胞，以流式细胞仪无菌分选；将所得到CD271⁺亚群细胞接种，加入浓度10v/v％的自体脐带血血清，于37℃、5％CO₂扩增培养6天；所述的自体脐带血血清还含有浓度50ng/ml热休克蛋白90。