发明名称 |
一种南极磷虾油中虾青素含量的测定方法 |
摘要 |
本发明公开了一种南极磷虾油中虾青素含量的测定方法,其工艺路线如下:南极磷虾油在以乙醇为溶剂的NaOH-乙醇溶液中低温皂化,使虾青素酯完全转化为游离虾青素,并测定南极磷虾油中虾青素在皂化过程中的加标回收率;采用Hypersil C<sub>18</sub>色谱柱,以二氯甲烷、甲醇、乙腈、水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0mL/min,检测器为紫外检测器,检测波长为478nm;确定游离虾青素的三种同分异构体,并采用三峰面积的加和定量。本发明只对南极磷虾油进行一步皂化处理,然后直接测定,并考察虾青素在皂化过程中的加标回收率,采用C<sub>18</sub>反相高效液相色谱法,测定的可靠性和准确性高,客观真实地测定南极磷虾油中虾青素的含量。 |
申请公布号 |
CN105203655A |
申请公布日期 |
2015.12.30 |
申请号 |
CN201510581613.3 |
申请日期 |
2015.09.14 |
申请人 |
大连工业大学 |
发明人 |
宋亮;宋玉昆;周大勇;陈晓婷;宋爽;杨静峰;朱蓓薇 |
分类号 |
G01N30/02(2006.01)I |
主分类号 |
G01N30/02(2006.01)I |
代理机构 |
大连格智知识产权代理有限公司 21238 |
代理人 |
刘琦 |
主权项 |
一种南极磷虾油中虾青素含量的测定方法,其特征在于,包括如下步骤:S1、称取两份重量相同的南极磷虾油,每份0.2~0.5g,其中一份添加1ml虾青素标准品;S2、向上述南极磷虾油中分别加入4~6ml无水乙醇溶解,加入0.100~0.115mol/L NaOH‑乙醇溶液2ml,定容到10~25ml,充氮后在4~25℃层析柜中进行皂化反应0.5~10h;皂化完成后,加入0.100~0.105mol/L磷酸‑乙醇溶液2~5ml终止反应;两份步骤S1所述南极磷虾油中各试剂的加入量均相同;S3、混合、离心取上清液,过0.22μm微孔滤膜,分别进行HPLC检测分析;S4、采用250mm×4.6mm×10μm规格的Hypersil C<sub>18</sub>色谱柱对虾青素进行分离检测;流动相的流速为0.5~1.0mL/min,检测器为紫外检测器,检测波长为478nm,进样量为5~50μL,柱温为20~30℃;按比例二氯甲烷:甲醇:乙腈:水=5.0:85.0:5.5:4.5,配制溶液A;按比例二氯甲烷:甲醇:乙腈:水=22.0:28.0:45.5:4.5配制溶液B;以A、B为流动相进行梯度洗脱;洗脱条件:0min~8min,A流动相为100%,B流动相为0%;8min~56min:A流动相从100%降到0%,B流动相从0%升到100%;S5、得出进样中游离虾青素的含量,得到加标回收率,进而获得南极磷虾油中虾青素含量,具体步骤为:S51、利用液相色谱检分别测得步骤S2得到的两种样品游离虾青素的面积,并利用面积归一化法分别得到总面积,总面积A=A<sub>全反式</sub>+1.1×A<sub>9‑顺</sub>+1.3×A<sub>13‑顺</sub>其中,A<sub>13‑顺</sub>、A<sub>全反式</sub>、A<sub>9‑顺</sub>分别为试样溶液中13‑顺虾青素、全反式虾青素、9‑顺虾青素的峰面积;1.1、1.3分别为9‑顺虾青素和13‑顺虾青素对全反式虾青素的校正因子;S52、结合步骤S4所述检测条件下得到的虾青素标准曲线,得到步骤S2得到的两种样品游离虾青素的含量;所述虾青素标准曲线为Y=99.6569x‑5.1469其中,Y为步骤T1得到的总面积,x为游离虾青素含量;S53、加标回收率:P=(C<sub>2</sub>‑C<sub>1</sub>)/C<sub>0</sub>×100%,其中C<sub>2</sub>为步骤S2得到的添加有标准品的磷虾油样品中游离虾青素量;C<sub>1</sub>为步骤S2得到的磷虾油样品中游离虾青素量;C<sub>0</sub>为虾青素标准品添加量;S54、利用加标回收率得到南极磷虾油中虾青素含量:南极磷虾油中虾青素含量:C=C<sub>1</sub>/P。 |
地址 |
116034 辽宁省大连市甘井子区轻工苑1号 |