一种食用菌菌丝快速PCR方法

摘要

本发明涉及一种食用菌菌丝快速PCR方法，包括：(1)制备PCR反应模板；(2)PCR反应；(3)电泳检测。本发明所需菌丝量少，无需耗时进行基因组DNA提取，具有操作简便，检测时间短，准确性高，稳定性和重复性好的优点；可以利用少量菌丝进行PCR扩增，获得所需的目的DNA片段，缩短试验进程，适用于大批量样品的PCR扩增。

主权项

一种食用菌菌丝快速PCR方法，包括：(1)用移液器吸取裂解液置于PCR管中，用灭菌牙签挑取预先培养的食用菌菌丝置于裂解液中离心，振荡，再离心；(2)以上述得到的菌丝裂解液为模板进行PCR扩增，PCR反应体系：12.5μL扩增混合液，待扩增基因特异性引物对各0.5μL，菌丝裂解液0.5μL，ddH₂O 11μL；PCR反应条件：95℃5min；95℃30s，(引物Tm值‑5)℃30s，72℃1min，35个循环；72℃10min；(3)取上述PCR扩增产物与加样缓冲液混匀，点样于琼脂糖凝胶上，于缓冲液中电泳，电泳结束后，用EB染色，然后拍照，即可。