在固相载体扩增核酸的方法

摘要

本发明提供了使用一固相载体从一核酸的混合物中扩增一核酸的方法。所提供的方法使用用户定义的引物寡核苷酸来进行定向扩增。同时所提供的方法还使用封闭子和取代子寡核苷酸来产生长度限定的扩增的目标核酸。一样本被施用于所述固相载体，所述样本中的所述目标核酸与一固定于一固相载体的第一寡核苷酸结合。含有一目标结合区域和一聚合酶启动子序列的一引物序列退火与所述被结合的目标核酸结合，延伸产生一第一双重核酸。所述目标序列移除后，留下与一固定于一固相载体的第二寡核苷酸结合的一第一核酸。所述第二寡核苷酸延伸以产生一含有一第二核酸的第二双重核酸，所述第二核酸通过添加一聚合酶扩增。

主权项

一从一含有一核酸混合物的样本中固定和扩增一目标核酸的方法，所述方法包括步骤：施用所述样本于一固相载体，所述固相载体含有与其粘附的一第一寡核苷酸与一第二寡核苷酸，其中所述第一寡核苷酸被封闭以防止从3’末端的延伸，并具有与所述目标核酸的一第一部分互补的序列，所述第二寡核苷酸具有一与所述目标核酸的一第二部分相同的序列，其中所述目标核酸与所述第一寡核苷酸结合，任选地洗涤所述固相载体以移除未结合的核酸；一引物与所述目标核酸杂交，其中所述引物含有一目标结合区域和一聚合酶启动子序列，通过聚合酶延伸所述引物以产生一第一双重核酸，任选地从所述双重核酸移除所述目标核酸以产生一第一核酸；所述第一核酸退火与所述第二寡核苷酸结合，通过聚合酶延伸所述第二寡核苷酸以产生一含有所述第一核酸和一第二核酸的第二双重核酸；和，通过聚合酶产生多重拷贝的一第三核酸，从而扩增所述目标核酸。