发明名称 |
一种检测DNA中的5-甲基胞嘧啶的方法 |
摘要 |
本发明涉及一种检测DNA中5-甲基胞嘧啶方法,该方法以不对称PCR原理为基础运用含荧光基团的(脱氧鸟苷三磷酸)dGTP来检测DNA中的5甲基胞嘧啶。具体检测步骤如下:先用亚硫酸氢钠法处理含5甲基胞嘧啶的DNA,将DNA中的胞嘧啶转化为尿嘧啶,再通过不对称PCR可以得到大量目标DNA的互补链,这样与DNA中的胞嘧啶互补的是不带荧光的腺嘌呤,而与5甲基基胞嘧啶互补的是带荧光的dGTP。再通过DNA凝胶电泳(PAGE)可以检测DNA中的5-甲基胞嘧啶。此后在492nm处激发可以对DNA中的5-甲基胞嘧啶进行荧光检测。 |
申请公布号 |
CN103789429B |
申请公布日期 |
2015.12.30 |
申请号 |
CN201410033529.3 |
申请日期 |
2014.01.24 |
申请人 |
武汉大学 |
发明人 |
周翔;洪婷婷 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 |
代理人 |
汪俊锋 |
主权项 |
一种非疾病诊断目的检测DNA中的5‑甲基胞嘧啶的方法,其特征在于,包括如下步骤:1)设计待测DNA的引物,引物不包含CpG岛;2)将DNA进行亚硫酸氢钠处理,将不含甲基的胞嘧啶转化成为尿嘧啶;3)进行不对称PCR,限制性引物和非限制性引物的比例为1:100,四种dNTP的终浓度为100μM,Fluorescein‑dGTP占总dGTP的75%;4)定性检测:将PCR产物用pore除盐柱除去未反应的Fluorescein‑dGTP,用超纯水溶解纯化后的PCR产物,以492nm波长激发,扫荧光光谱,若发现荧光,则目标DNA中含有5甲基胞嘧啶;定量检测:将PCR产物进行12%中性聚丙烯酰胺凝胶电泳,根据相应电泳条带的荧光强度来定量分析5甲基胞嘧啶的含量。 |
地址 |
430072 湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学 |