一种具有促进成骨细胞增殖活性的乳铁蛋白肽的制备方法及应用

摘要

一种具有促进成骨细胞增殖活性的乳铁蛋白肽的制备方法及应用，本发明涉及一种生物活性肽的制备方法，它为了解决现有缺少从乳铁蛋白中获取促进成骨细胞增殖活性的蛋白肽的方法。制备方法：一、乳铁蛋白与去离子水混合，调节pH；二、胃蛋白酶加入到乳铁蛋白溶液中，水浴反应；三、过滤后采用阳离子交换柱分离纯化，然后透析冻干；四、过滤后采用凝胶过滤层析柱进行纯化；五、最后进行干燥处理得到该乳铁蛋白肽。本发明以牛乳铁蛋白为原料，制备得到的乳铁蛋白肽对成骨细胞具有良好的促进其增殖的效果。制备得到的该乳铁蛋白肽可以应用于保健食品或功能性食品中。

主权项

一种具有促进成骨细胞增殖活性的乳铁蛋白肽的制备方法，其特征在于是按下列步骤实现：一、将乳铁蛋白与去离子水混合，制备成质量浓度为2％～8％的乳铁蛋白水溶液，然后用HCl调节体系的pH至1.2～2.5，得到乳铁蛋白溶液；二、将胃蛋白酶添加到步骤一得到的乳铁蛋白溶液中，在35℃～40℃水浴3～10min后冰浴冷却，加入碱性调节剂调节体系的pH至6～7终止反应，然后离心处理获取上清液，除盐后得到乳铁蛋白活性肽的酶解液；三、将乳铁蛋白活性肽的酶解液进行膜过滤，然后通过SP Sepharose Fast Flow阳离子交换柱分离纯化，采用缓冲溶液A和缓冲溶液B线性梯度洗脱，检测波长为215nm和280nm，收集第5个峰的洗脱组分，再经过透析除盐后冻干，得到初步分离纯化的乳铁蛋白活性肽；四、用去离子水将初步分离纯化的乳铁蛋白活性肽配制成浓度为1～3mg/mL的乳铁蛋白活性肽溶液，经滤膜过滤后采用Superdex Peptide 10/300GL凝胶过滤层析柱进行纯化，采用缓冲溶液A洗脱，检测波长为215nm和280nm，收集第1个峰的洗脱组分，超滤浓缩后得到乳铁蛋白肽溶液；五、通过真空冷冻干燥或低温喷雾干燥对乳铁蛋白肽溶液进行干燥处理，得到具有促进成骨细胞增殖活性的乳铁蛋白肽；其中所述的缓冲溶液A为pH＝7.0～7.5的磷酸盐缓冲溶液，向缓冲溶液A中添加NaCl，得到含有0.5～2mol/L NaCl的缓冲溶液B。