香茶藨子茎尖再生扩繁的方法

摘要

本发明为香茶藨子茎尖再生扩繁的方法，属于植物组织培养领域，具体涉及到对香茶藨子茎尖诱导丛生芽植物组织培养技术扩繁的研究。本发明包括：（1）取材、（2）培养基的配制、（3）材料处理、（4）丛生芽诱导培养、（5）增殖培养、（6）诱导生根、（7）小苗移栽。本发明的有益效果在于：本发明可以使香茶藨子在短时间内建立无菌株系 进行大量产业化生产，并可以周年生产，繁殖速度快，为园林建设提供大量优质苗木；由于本发明的外植体选取的是茎尖，后代可保持母系稳定的遗传性状，为企业提供技术含量高的生产技术，使其植株大小一致，便于产业化统一管理。

主权项

一种香茶藨子茎尖再生扩繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）取材：     选取无病虫害健壮的香茶藨子植株上切取带芽茎段，剥取茎尖为外植体材料；（2）培养基的配制：    ①茎尖诱导丛生芽初代培养基:MS +0.5‑2.0mg/L KT+0.1‑0.9mg/LIBA +20‑30g/L 蔗糖 +3‑6 g/L 琼脂 +500‑800mg/L PVP   pH值调至5.8‑5.9之间；    ②单个丛生芽诱导腋芽增殖培养基：MS +0.1‑0.9mg/L 6‑BA +0.1‑0.9 IBA +20‑30g/L 蔗糖 +3‑6 g/L 琼脂 +800mg/L PVP   pH值调至5.8‑5.9之间；生根培养基：1/4‑1/2MS +0.1‑1.0mg/LNAA +20‑30g/L 蔗糖 +3‑6 g/L 琼脂  pH值调至5.8‑5.9之间；（3）材料处理：    ①将香茶藨子带有侧芽或顶芽的茎段放在烧杯里加入几滴吐温‑20，在自来水下冲洗30‑50min，转移至超净工作台内以质量浓度为70‑75%的酒精消毒摇荡28‑32s．后倒出酒精，用无菌水冲洗2‑3次，加入质量分数为0.1%升汞溶液处理8‑12min，将升汞倒出用无菌水冲洗6~8遍后，用消毒滤纸吸干表面水分；剥取2mm‑4mm左右的茎尖，接种至初代培养基中培养；    ②待茎尖初代培养出来的丛生芽转移至超净工作台上，取出外植体放在无菌滤纸上，切开丛生芽使其成为单芽，单芽既可以用来继代增殖培养又可以进行生根培养；（4）丛生芽诱导培养：    将剥取的2mm‑4mm左右的茎尖，接种至初代培养基中培养，培养温度为25±2℃，光照时间10‑12h/d,光照强度2000‑3000lux；（5）增殖培养：      将待茎尖初代培养出来的丛生芽切开使其成为单芽，单芽接种在增殖培养基中；培养温度为25±2℃，光照时间10‑12h/d,光照强度2000‑3000lux；（6）诱导生根： 当丛生芽长至2cm高时，将芽分割成单株，转移到生根培养基中，培养温度为25±2℃下暗培养；（7）小苗移栽： 当试管苗长至3‑4cm高，有3‑5条根，3‑4片叶片，叶片长度1‑2cm时，进行炼苗，将试管苗放在自然光下炼苗5d，后打开瓶盖上的封口膜先进行炼苗2d，期间用喷壶喷洒叶片保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力，然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，然后栽于基质中定植,基质配方为腐殖土：珍珠岩：蛭石=3：1：1，待40d后达到移栽苗；保持空气湿度在80%以上，放置在阴凉通风处，光线由前期弱到强。