一种利用荧光PCR技术对小鼠的分型鉴定方法

摘要

本发明涉及一种利用荧光PCR技术对小鼠的分型鉴定方法，利用荧光PCR引物，经PCR扩增后将产物与已知片段大小的ROX混合，利用377测序，使用Genemapper软件计算出PCR产物的大小，从而达到鉴定小鼠基因型的目的，即可。本发明简单直接准确的鉴定出Crispr/Cas9敲除的mircoRNA小鼠。

主权项

一种利用荧光PCR技术对小鼠的分型鉴定方法，包括：(1)利用Crispr/Cas9系统敲除mircoRNA的C57BL/6J小鼠，得到Founder小鼠；将Founder小鼠与C57BL/6J小鼠杂交，得到F1代小鼠，F1代杂合小鼠得到F2代；(2)分别取上述F1、F2代小鼠尾组织，然后提取DNA；(3)在Crispr/Cas9系统敲除的基因位点区域设计一对PCR引物，且在上游引物的5’端使用FAM荧光修饰，得到荧光引物；(4)将荧光引物对步骤(2)中的DNA进行PCR扩增，然后将PCR产物与分子内标混合，在测序仪上经过电泳分离，鉴定。