一种固体发酵生产饲用凝结芽孢杆菌的方法

摘要

本发明公开了一种固体发酵生产饲用凝结芽孢杆菌的方法，属于微生物发酵技术领域。方法包括(1)凝结芽孢杆菌的种子液培养；(2)三角瓶固体菌种的制备；(3)凝结芽孢杆菌的有氧固体发酵培养；(4)凝结芽孢杆菌的厌氧固体发酵培养等步骤、工艺。本发明利用凝结芽孢杆菌先有氧发酵后厌氧发酵的工艺，具有凝结芽孢杆菌发酵水平高，芽孢生成率高等特点。本发明可在饲用凝结芽孢杆菌生产及畜禽、水产企业中推广应用。

主权项

一种固体发酵生产饲用凝结芽孢杆菌的方法，其特征在于按以下步骤进行：(1)保藏号为ACCC No.00403菌株的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)的种子液培养：将凝结芽孢杆菌斜面菌种接入三角瓶培养基中,300ml三角瓶培养基装量为50ml，经35～38℃，180～200rpm摇床培养16～20h后成为三角瓶液体种子，备用；所述三角瓶的种子培养基为：乳糖1.0％蛋白胨1％牛肉浸膏0.5％氯化钠0.5％，调pH为7.0～7.5，121℃灭菌15min；(2)凝结芽孢杆菌三角瓶固体菌种的制备：500ml的三角瓶中装由麸皮、米糠和乳糖按重量份80～90∶10～20∶1～2比例配制而成的培养基20～30g，并按该固形物重量的1～1.2倍加入水、拌匀，经0.1Mpa灭菌30min后成固体培养基；再在每瓶中接入步骤(1)种子液各2ml，混合均匀、35～38℃培养24h后，于0～4℃保存，备用；(3)凝结芽孢杆菌有氧固体发酵培养：固体发酵培养基为麸皮∶米糠∶氢氧化钙按重量份80～90∶20～10∶1～2的比例配制而成，加与固形物同等重量水，0.1Mpa灭菌30min；将步骤(2)每瓶三角瓶固体种子加150～300ml无菌水充分搅拌后，按每瓶种子∶以固形物重量计的10～20公斤固体发酵培养基比例接种，装入曲盘至发酵物料厚度为2～3cm后，于35～38℃室温条件下进行有氧发酵培养20～24h，然后立即进入下一步的厌氧固体发酵；(4)凝结芽孢杆菌厌氧固体发酵培养：将经曲盘有氧发酵后的培养物转入密封的塑料袋中，扎紧塑料袋，尽量赶走袋中的空气，继续在35～38℃培养条件下培养24～36h；至凝结芽孢杆菌芽孢率达到80％以上时，停止发酵；在不高于50℃条件下将发酵物烘干、粉碎成40目后，检验、包装成产品。