基于水解探针法的可同时检测地中海贫血-α^21.9缺失型和α2变异的试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于水解探针法的可同时检测地中海贫血-α^21.9缺失型和α2变异的试剂盒。所述α2变异为α-珠蛋白基因簇(NG_000006.1)中α2基因的变异基因型，该基因型被描述为HBA2:c.301-24delinsCTCGGCCC。上述试剂盒包括一对可以扩增-α^21.9等位基因的特征序列的引物，一对可以扩增α2变异等位基因的特征序列的引物，一对可以扩增内参基因GAPDH片段的引物；特异性检测-α^21.9扩增产物的探针，特异性检测α2变异等位基因扩增产物的探针和特异性检测GAPDH片断扩增产物的探针。上述试剂盒可单管单次反应直接完成α2变异和-α^21.9基因型的检测。

主权项

基于水解探针法的可同时检测地中海贫血‑α^21.9缺失型和α2变异的试剂盒，包括扩增引物和荧光探针，其特征在于：所述α2变异为α‑珠蛋白基因簇(NG_000006.1)中α2基因的变异基因型，该基因型被描述为HBA2:c.301‑24delinsCTCGGCCC；所述的扩增引物为：一对可以扩增α‑珠蛋白基因簇中‑α^21.9等位基因的特征序列的引物21.9‑F和21.9‑R，一对可以扩增α‑珠蛋白基因簇中HBA2:c.301‑24delinsCTCGGCCC等位基因的特征序列的引物A2V‑F和A2V‑R，以及一对可以扩增内参基因GAPDH片段的引物GAPDH‑F和GAPDH‑R；所述的荧光探针为：一条特异性检测21.9‑F和21.9‑R扩增产物的荧光探针21.9‑Prob，一条特异性检测A2V‑F和A2V‑R扩增产物的荧光探针A2V‑Prob，一条特异性检测GAPDH‑F和GAPDH‑R扩增产物的荧光探针GAPDH‑Prob；其中：所述可以扩增α‑珠蛋白基因簇中‑α^21.9等位基因的特征序列的引物对中，21.9‑F：5’‑GGAGCTTTTCCTTCCCTGGAACG‑3’；21.9‑R：5’‑TGTGGTTGGAGAATGGAGGTGG‑3’；所述可以扩增α‑珠蛋白基因簇中HBA2：c.301‑24delinsCTCGGCCC等位基因的特征序列的引物对中，A2V‑F：5’‑GGGTTGCGGGAGGTGTAG‑3’；A2V‑R：5’‑TCCTTGGTCTGAGACAGGTA‑3’；所述可以扩增内参基因GAPDH片段的引物对中，GAPDH‑F：5’‑CCCCACACACATGCACTTACC‑3’；GAPDH‑R：5’‑CCTAGTCCCAGGGCTTTGATT‑3’；所述特异性检测21.9‑F和21.9‑R扩增产物的荧光探针21.9‑Prob为：21.9‑Prob：5’‑6‑FAM‑CTGGGGAAGGGTGGGTGGGAATAACAGC‑BHQ‑1‑3’；所述的特异性检测A2V‑F和A2V‑R扩增产物的荧光探针A2V‑Prob为：A2V‑Prob：5’‑6‑ROX‑CCTCGGCCCCACTGACCCTC‑BHQ‑1‑3’；所述的特异性检测GAPDH‑F和GAPDH‑R扩增产物的荧光探针GAPDH‑Prob为：GAPDH‑Prob：5’‑CY5‑AAAGAGCTAGGAAGGACAGGCAACTTGGC‑BHQ‑2‑3’。