一种快速检测凝血酶的电化学适配体传感器的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种电化学技术领域的检测方法，具体是利用金纳米-甲酰基咪唑修饰还原石墨烯和钴钯纳米粒子构建一种快速检测凝血酶的夹心型电化学适配体传感器，属于新型功能材料及生物传感分析技术领域。用于凝血酶的检测，线性范围为0.010～2.00ng·mL^-1，检测限为0.0032ng·mL^-1。

主权项

一种快速检测凝血酶的电化学适配体传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）选择巯基修饰的凝血酶捕获探针Apt1和生物素修饰的凝血酶报告探针Apt2；（2）合成金纳米粒子修饰的甲酰基咪唑修饰还原石墨烯Au@GS‑FI称取质量比为1 : 1 ~ 1.2的甲酰基咪唑修饰还原石墨烯GS‑FI和氯金酸，用水分散24 h，离心去除上清液，重新用水分散，并用盐酸调节pH＜2，搅拌至少30 min，逐滴加入40~60 mmol•L^‑1的NaBH₄溶液至氯金酸全部还原，最后，离心并用超纯水洗三次，在真空干燥箱中烘干；（3）钴钯纳米粒子CoPdNPs修饰的凝血酶报告探针CoPdNPs‑Apt2的制备将3~5 mg、粒径7~9 nm左右的钴钯纳米粒子CoPdNPs，加入到1.5~2.5 mL浓度为0.05 mol•L^‑1的十六烷基三甲基溴化铵CTMAB溶液中，超声30 min，将油溶性的钴钯纳米粒子CoPdNPs改性为水溶性，离心除去多余的十六烷基三甲基溴化铵CTMAB，将离心后的钴钯纳米粒子CoPdNPs重新分散于pH 7.4的PBS缓冲溶液中；向钴钯纳米粒子CoPdNPs溶液中加入80~120 μL的1 mg•mL^‑1的亲和素， 37 ℃下振荡孵育120 min，离心除去未与钴钯纳米粒子纳米粒子CoPdNPs结合的亲和素，制得亲和素化的钴钯纳米粒子CoPdNPs；再向亲和素化的钴钯纳米粒子CoPdNPs溶液中加入80~120μL 的10 μg•mL^‑1生物素修饰的Apt2，在37 ℃下，振荡孵育30 min，离心除去未与钴钯纳米粒子CoPdNPs结合的Apt2；重新分散于2 mL、pH 7.4的PBS缓冲溶液中，制得2 mg•mL^‑1 的钴钯纳米粒子CoPdNPs修饰的凝血酶报告探针CoPdNPs‑Apt2溶液，储存在4 ℃下备用；（4）Au@GS‑FI ‑Apt1/Tb/CoPdNPs‑Apt2夹心型电化学适配体传感器的制备1）用氧化铝粉对玻碳电极进行预处理，无水乙醇超声清洗，将电极置于5 mmol•L^‑1铁氰化钾溶液中，在‑0.2～0.6 V电位下扫循环伏安，峰电位差小于110 mV；2）将金纳米粒子修饰的甲酰基咪唑修饰还原石墨烯Au@GS‑FI超声分散处理，制得分散性好的Au@ GS‑FI溶液；3）将分散好的Au@ GS‑FI溶液滴涂到玻碳电极表面，置于红外灯下烤干；4）在电极上滴涂上凝血酶捕获探针Apt1，置于4 ℃下晾干；5）将6‑巯基己醇滴涂电极上，置于4 ℃下晾干，用于封闭非特异性活性位点；6）在电极上滴涂一定浓度的凝血酶，置于4 ℃下晾干；7）滴涂钴钯纳米粒子CoPdNPs修饰的凝血酶报告探针CoPdNPs‑Apt2溶液，置于4 ℃下晾干，制得Au@ GS‑FI ‑Apt1/Tb/CoPdNPs‑Apt2电化学适配体传感器。