制备和纯化因子VIII及其衍生物的方法

摘要

本发明公开了通过体外培养哺乳动物细胞，在无血清培养基中生产具有因子VIII促凝血活性的蛋白质的方法，其中无血清培养基包含以培养细胞释放的蛋白酶的抑制剂。按照本发明，该抑制剂可以在培养过程中保护靶蛋白的切割和提高靶分子的同质性，其中该抑制剂可以是硫酸葡聚糖。本发明也涉及通过亲和色谱从既包含靶分子又包含选择的抑制剂的培养基中纯化靶分子的方法。

主权项

1、在培养基中，从用含有编码FVIII或者FVIII衍生物的cDNA的DNA表达载体转化的哺乳动物的宿主细胞中生产重组因子VIII，并使用与固相支持体相连的因子VIII的特异性亲和分子来纯化所述因子VIII的方法，其包括：a)在补充有硫酸葡聚糖的培养基中培养所述哺乳动物的宿主细胞；b)通过超滤浓缩所述含有因子VIII的培养基；和c)通过免疫学的方法，从浓缩的培养基中纯化所述因子VIII。