主权项 |
1、一种番薯茎尖培养脱毒苗的方法,其特征在于:具体步骤如下:1)、种薯育苗选择适宜当地栽培的高产优质品种薯块,用50~54℃的温水浸种消毒后在地里排种种植至幼苗长至25~30cm;2)、取材灭菌剪取幼苗茎尖顶端3~5cm,剪去较大的叶片,经流水冲洗数分钟,用滤纸吸干表面水分后,进行消毒处理;3)、茎尖剥离将消毒好的茎尖剥去叶片,切取0.3~0.5mm、含1~2个叶原基的茎尖分生组织,接种在茎尖分生组织培养基中培养;所述茎尖分生组织培养基是以MS为基础培养基,并添加0.8~1.2mg/L 6-BA、0~0.12mg/L IBA、7.4g/L gar、30g/L Sucrose;4)、茎尖成苗培养待茎尖分生组织膨大变绿后,转移到茎尖成苗培养基中培养成苗;所述茎尖成苗培养基是以MS为基础培养基,并添加0~0.12mg/LIBA、0~0.12mg/L GA3、7.4g/L gar、30g/L Sucrose;5)、茎尖苗的试管内初级快繁当茎尖苗长至3~6cm时,将小植株切段后置于MS培养基中进行短枝扦插培养至生成试管苗;6)、脱毒鉴定待试管苗的每个株系有10~15株后,将同一株系的试管苗分成两部分:一部分保存;一部分直接用于病毒鉴定;7)、脱毒苗叶片诱导扩繁在无菌条件下,将番薯脱毒试管苗的叶片切割成3~5毫米见方的叶块,置于叶片诱导培养基中培养至分化出幼小植株,将幼小植株移植到1/2MS培养基中培养至成长为脱毒生根苗后驯化移栽;所述叶片诱导培养基是以MS为基础培养基,并添加0.8~1.2mg/L IBA、0~1.0mg/L 6-BA、7.4g/L gar、30g/L Sucrose;8)、试管苗驯化移栽将株高3~5cm的脱毒生根苗置于室温和自然光照下驯化2~3d,使幼苗逐渐适应外界环境条件,然后移栽到苗床,作为在隔离室中繁殖生产原原种薯的茎尖苗。 |