基于引物延伸的DNA测序方法

摘要

核酸序列测定方法：在被测的DNA模板中引入一段已知的DNA序列，使之固定于固相基质上；设计1-15个寡核苷酸DNA引物组合，使其含有一段与上述加入的DNA序列互补的序列，使该1-15个寡核苷酸DNA引物的3’端分别含有0、1、2、……、14个简并性核苷酸；根据待测核苷酸位点的位置，从上述引物组合中选择一种引物，将其与固定DNA模板杂交，使待测核苷酸位点挨着引物3’末端；用DNA聚合酶及用四种可分辨的标记物标记的双脱氧核苷酸底物或分别用一种或几种标记物标记的四种脱氧核苷酸或双脱氧核苷酸，在杂交到模板上的引物上进行核苷酸延伸；检测被延伸核苷酸种类，DNA模板被测碱基的种类与延伸核苷酸种类互补。

主权项

1. 一种用于确定未知核酸序列的核酸序列测定方法，其特征在于：A)在被测的DNA模板中引入一段已知的通用DNA序列，并使之固定于固相基质上；B)设计1-15个寡核苷酸DNA引物组合，使其含有一段与上述加入的通用DNA序列互补的序列，并使该1-15个寡核苷酸DNA引物的3’端分别含有0、1、2、......、14个简并性核苷酸：C)根据待测核苷酸位点的位置，从上述引物组合中选择一种引物，并将其与步骤A)中所述的固定DNA模板杂交，使待测核苷酸位点紧接着引物3末端；D)用DNA聚合酶及用四种可分辨的标记物标记的双脱氧核苷酸底物或分别用一种或几种标记物标记的四种脱氧核苷酸或双脱氧核苷酸，在杂交到模板上的引物上进行一种核苷酸延伸；E)检测步骤D)中被延伸核苷酸种类，步骤A)中DNA模板被测碱基的种类与延伸核苷酸种类互补。