游离细胞植入法培育有核珍珠的方法

摘要

游离细胞植入法培育有核珍珠，本发明涉及有核珍珠育珠方法，需要解决有核珍珠育珠珍珠质不均匀分布，产生污珠、尾巴珠、疵珠的问题，提高育珠质量。本发明的技术方案包括采用河蚌的外套膜外表皮，其特征是采用酶解法获得外套膜外表皮细胞，调整细胞浓度5×10⁵到1×10⁶之间；将以0.1mg/mL多聚赖氨酸处理过的珠核置于游离外套膜细胞悬液中培养粘附，使细胞粘附于珠核表面；取0.2mL游离细胞悬液植入到育珠蚌体内，接着将粘附细胞的珠核植入育珠蚌体内，最后补加0.2mL细胞悬液；经过植入手术处理过的育珠蚌在水面下20cm竖直吊养培育，本发明适于培育有核珍珠。

主权项

1. 游离细胞植入法培育有核珍珠的方法，用1龄或1龄以内健康、活力强的小蚌分离出河蚌的外套膜外表皮，其特征是外套膜外表皮浸泡到0.01％的高锰酸钾溶液中消毒10min，然后在超净工作台上用1000U/mL青霉素+1000U/mL链霉素清洗液清洗，再用灭菌的平衡盐溶液D-Hanks冲洗4-5次，将外套膜外表皮剪成1mm2的小块，于0.25％胰酶中37℃下消化30min后，用300目绢网过滤去除多余组织块，以完全培养基终止胰酶作用和分散细胞，调整细胞悬液浓度的细胞数在5×105到1×106之间；挑选珠核，洗涤后灭菌处理，以0.1mg/mL多聚赖氨酸处理过夜，无菌条件下干燥，平衡盐溶液D-Hanks冲洗待用；经处理的珠核置于游离外套膜细胞悬液中培养粘附，使细胞粘附珠核表面；选择健壮的2龄和3龄育珠蚌，洗刷体表并暂养于清水中；然后用经过消毒处理的通道针在育珠蚌外套膜上开口，并制造通道，向通道中先滴加0.2mL细胞悬液，再将粘附细胞的珠核移植到育珠贝体内，后于通道中再滴加0.2mL细胞悬液；经过手术处理过的育珠蚌在水面下20cm竖直吊养培育。