发光细菌法快速检测海水中BOD的方法

摘要

本发明涉及发光细菌法快速检测海水中BOD的方法，本发明通过发光细菌作为检验海水BOD的受试生物，同时利用人工海水、葡萄糖、谷氨酸配制BOD标准溶液，解决了以往海水BOD检测中由于检测限过高，给结果带来的影响。

主权项

1、发光细菌法快速检测海水中BOD的方法，其特征在于，该方法具体步骤如下：一、发光细菌的培养：菌种采用明亮发光杆菌T3变种(Photobacterium phosphoreum)，制备发光细菌新鲜菌悬液：(1)斜面菌种培养：在新鲜斜面上接出第一代斜面，25℃±0.5℃培养24h后立即转接第二代斜面，25℃±0.5℃培养24h后再转接第三代斜面，25℃±0.5℃培养24h后备用；(2)摇瓶菌液培养：取第三代斜面菌种近一环，接种于装有30ml细菌培养液的100ml三角烧瓶中，25℃±0.5℃，160r/min下培养24h备用；(3)将培养后的发光细菌新鲜菌悬液稀释至每毫升108个～109个细胞，初始发光度不低于800mV，备用；斜面和菌液的营养基为：胰蛋白胨0.5g NaCl 3g Na2HPO4 0.5g KH2PO4 0.5g酵母0.5g 甘油0.3g 蒸馏水100ml 固体培养基加琼脂1.69g二、BOD标准溶液的制备：各自称取0.15g葡萄糖和谷氨酸溶解于1L的人工海水中，人工海水的配方为：NaCl 20gMgSO4 3.6gMgCl2 7.2g无水CaCl2 0.7g蒸馏水 1000ml。配得溶液的BOD值相当于220mg/L，将溶液稀为1mg/L、2mg/L、4mg/L、6mg/L、8mg/L、10mg/L等6个梯度；三、发光细菌发光度增加量的测定：测定时的室温要控制在20～25℃，同一批样品在测定过程中要求温度波动不超过±1℃。取若干试管，给每支管中加0.6ml步骤一培养的发光细菌菌液，部分作为对照管的试管中放0.05ml人工海水，作为样品管的试管中放0.05mlBOD标准溶液，20min后放入发光光度计中检测。发光细菌发光度的增加量＝样品管-空白管。