一种快速纯化制备Fab片段抗体的工艺方法

摘要

本发明公开了一种快速纯化制备片段抗体的工艺方法，该方法采用膜过滤-疏水层析I-疏水层析II三步法纯化目标产物，首先采用膜过滤分离的方式去除培养基上清中的细胞和细胞碎片，然后用分辨离率较低的疏水层析高效捕获酵母细胞大规模培养上清液中的片段抗体，并高度浓缩目标产物；最后用分辨离率较高的疏水层析，通过控制疏水层析的结合与分离条件，获取纯度不低于90％的片段抗体，整个纯化过程在12小时内即可完成。特别适宜真核细胞和原核细胞培养生产的基因工程产物的纯化，具有稳定性好、可控性强、过程控制指标明确、可操作性强、批次间结果差异小等特点。

主权项

一种快速纯化制备Fab片段抗体的工艺方法，其特征在于，该方法采用膜过滤-疏水层析I-疏水层析II三步法纯化目标产物，首先采用膜过滤分离的方式去除培养基上清中的细胞和细胞碎片，然后用分辨率较低的疏水层析高效捕获酵母细胞大规模培养上清液中的Fab片段抗体，并浓缩目标产物；最后用分辨率较高的疏水层析，通过控制疏水层析的结合与分离条件，获取纯度不低于90％的Fab片段抗体；所述的膜过滤分离为：采用过滤分离系统去除全部的细胞及细胞碎片，以1～2L/min的流速过滤细胞培养上清，除去细胞及细胞碎片，过滤膜的孔径为0.8～1.2μm；过滤分离系统进口压力为：0～1bar，出口压力为：0～0.5bar；温度10～25℃；所述的疏水层析I为：将目标产物浓缩后进行初步纯化，初步纯化的过程及参数为：a.样品处理：过滤后的细胞培养上清中加入固体硫酸铵0.5～0.8M，加入速度控制在5～10g/min之间，调节电导率为50～150ms/cm，以0.22μm孔径膜过滤；b.吸附条件：用缓冲系统A液充分平衡层析柱后直接上样，流速1～30ml/min，压力大于0bar且小于或等于6bar，温度10～25℃；c.解吸附条件：用洗脱液B液直接洗脱，收集洗脱峰；所述的疏水层析II：获取高纯度、无菌、无热源、高活性Fab片段抗体，其过程及参数为：a.样品处理：疏水层析I收集的洗脱液中加入固体硫酸铵0.5～0.8M，加入速度控制在5～10g/min之间，调节电导率为50～150ms/cm，以0.22μm孔径膜过滤澄清；b.吸附条件：用缓冲系统A液充分平衡层析柱后直接上样，流速1～30ml/min，压力大于0bar且小于或等于6bar，温度10～25℃；c.解吸附条件：用40～70％B液直接洗脱，收集洗脱峰1，用100％B液直接洗脱，收集洗脱峰2，洗脱峰1即为Fab片段抗体；经冷冻干燥保存目标产物Fab片段抗体，即得到纯度不低于90％的Fab片段抗体；所述缓冲系统A液为：0.4～0.8M的硫酸铵，10～50mmol/l的磷酸盐缓冲液，pH 7.0～8.0；所述的B液为：10～50mmol/l的磷酸盐缓冲液，pH 7.0～8.0。