一种重组角质酶的发酵生产工艺

摘要

本发明公开了一种重组角质酶的发酵生产工艺，属于发酵工程技术领域。本发明采用重组大肠杆菌E.coLi BL21(DE3)作为生产菌种，通过在发酵4-5个小时后连续补加甘油控制一定的残余甘油浓度，发酵6-7个小时一次性添加甘氨酸，发酵8-9个小时候连续补加乳糖控制一定残余乳糖浓度，发酵培养28-32小时后，角质酶的酶活达到500U/mL。本发明采用工业上常用的甘油、蛋白胨、酵母粉等原料进行生产，适于大规模生产，通过补料和诱导发酵调控，发酵周期比摇瓶发酵缩短一半，最高酶活比摇瓶发酵提高了5倍，为基因工程菌的扩大生产奠定了基础。

主权项

一种重组角质酶的发酵生产工艺，其特征在于以重组大肠杆菌{Tfu_0883/pET20b(+)/E.coLi BL21(DE3)}作为生产菌种，包括如下步骤：(1)种子培养：将-80℃甘油管保存的菌种接入种子培养基中，使用回转恒温调速摇床进行培养；控制转速200rpm/min，培养温度37℃，初始pH值7.10，培养时间8小时；(2)发酵培养：将培养好的种子液按接种量5％接入3L发酵罐进行发酵培养(装液量1L)发酵培养28-32小时；在发酵培养中，向发酵罐中通入无菌空气，通气量1.5L/min，设定培养温度35℃、搅拌转速为500rpm/min；流加30％的氨水控制发酵培养pH在7.0-7.1；(3)甘油补料：发酵培养进行到4-5小后，补加500g/L的甘油补料液，使发酵液中甘油浓度维持在2-5g/L；(4)乳糖诱导：发酵培养8-9小时(OD600为30)后，补加浓度为200g/L乳糖补料液，使发酵液乳糖浓度控制在4-6g/L；(5)甘氨酸补料：发酵培养6-7小时(OD600为15)后，一次性添加甘氨酸至终浓度为0.5％(质量分数)。