| 摘要 |
1. G-CSF-предшественник, содержащий сигнальный пептид и G-CSF-пептид, где сигнальный пептид содержит последовательность человеческого сигнального пептида дикого типа молекулы человеческого G-CSF/b, содержащего, по меньшей мере, одну мутацию, выбранную из группы, состоящей из: ! - делеции Glu29, ! - вставки Glu26, ! - замены Lys11Leu, ! - замены His21Phe и ! - замены Gln28Leu. ! 2. G-CSF-предшественник по п.1, содержащий, по меньшей мере, две или, по меньшей мере, три или, по меньшей мере, четыре или пять мутаций по п.1. ! 3. G-CSF-предшественник по п.1 или 2, содержащий до 3 дополнительных мутаций в сигнальном пептиде, выбранных из вставки, делеции и замены. ! 4. Полинуклеотид, кодирующий G-CSF-предшественник по любому из пп.1-3. ! 5. Полинуклеотид, комплементарный полинуклеотиду по п.4. ! 6. Вектор, содержащий полинуклеотид по п.4 или 5. ! 7. Трансфицированная клетка, содержащая полинуклеотид по п.4 или 5, или вектор по п.6. ! 8. Трансфицированная клетка по п.7, где клетка представляет собой эукариотическую клетку, предпочтительно человеческую клетку, более предпочтительно клетку HEK293 и более предпочтительно клетку HEK293F. ! 9. Трансфицированная клетка по п.7 или 8, где трансфекция является транзиторной. ! 10. Трансфицированная клетка по п.7 или 8, где трансфекция является стабильной. ! 11. Способ экспрессии G-CSF, содержащий стадии ! - культивирования трансфицированных клеток по любому из пп.7-10 в подходящей культуральной среде; ! - изолирования G-CSF из культуральной среды. !12. Способ по п.11, где культивирование осуществляют при рН в интервале 6,8-7,5, предпочтительно 7,1-7,3. ! 13. Способ по п.11, где культивирование осуществляют в присутствии инсулина с концентрацией в интервале 5-25 мг/мл, предпочтит� |
