| 摘要 |
1. Способ скрининга библиотеки РНК-дисплея scFv-антител, где способ включает стадии: ! (a) предоставления сшитой с пуромицином или его аналогом молекулы мРНК одноцепочечной Fv (scFv), причем указанная молекула содержит мРНК, кодирующую 5'-scFv и 3'-спейсерную последовательность, и сшита с линкером из одноцепочечной нуклеиновой кислоты, причем линкер содержит пуромицин или его аналог на 3'-конце и псорален C6 на 5'-конце; ! (b) трансляции in vitro сшитой с пуромицином мРНК scFv в присутствии метки при условиях, при которых образуется меченая сшитая с пуромицином молекула мРНК scFv/белок; ! (c) очистки меченой сшитой с пуромицином молекулы мРНК scFv/белок; ! (d) подвергания меченой сшитой с пуромицином молекулы мРНК scFv/белок набору антигенов, по меньшей мере, с одним антигеном; и ! (e) выделения очищенной меченой сшитой с пуромицином молекулы мРНК scFv/белок с использованием основанных на аффинности магнитных гранул. ! 2. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию (g) обратной транскрипции мРНК scFv после отбора антигена для создания кДНК. ! 3. Способ по п.2, дополнительно включающий стадию (h) амплификации кДНК. !4. Способ по п.1, где метка представляет собой радиоактивную метку. ! 5. Способ по п.4, где метка представляет собой 35S-метионин или цистеин. ! 6. Способ по п.1, где последовательность 3'-спейсера содержит от приблизительно 0 до приблизительно 200 аминокислот. ! 7. Способ по п.1, где последовательность 3'-спейсера содержит приблизительно 16 аминокислот. ! 8. Способ по п.1, где последовательность 3'-спейсера содержит аффинную метку. ! 9. Способ по п.1, где линкер нуклеиновой кислоты содержит в направлении от 5' к 3': ! - псорален C6; ! - 2'OMe-рибонуклеотиды, содержащие по |
