一种目的基因的漂移处理检测方法

摘要

一种目的基因的漂移处理检测方法，包括收集转基因细胞培养液、核移植操作液和胚胎培养液等可能含有外源基因的液体，对其进行高压处理，然后对液体进行浓缩；针对外源基因的基因序列设计引物，通过PCR技术，特异性扩增外源基因的DNA片段，根据PCR扩增结果，判断在转基因细胞筛选过程中以及胚胎生产和培养过程中所产生的液体经处理后是否还有外源基因的存在。本发明这种处理检测方法完全可以避免外源基因的漂移，保证了转基因动物生产过程中的环境安全。适用于来源于人的防御素-3基因的转基因奶牛和山羊的生产过程中的基因漂移的检测。

主权项

一种目的基因的漂移处理检测方法，其特征在于，该方法包括：1)样品的收集和处理1.1)将培养的转基因细胞废液、细胞冷冻解冻后的冻存液，以及核移植过程中的操作液和胚胎培养过程中的培养液收集起来；1.2)对收集的废液在121.5℃的温度下进行高压处理30min，压力在103.4kPa；1.3)经高压处理后的收集液，取4个1.5ml的离心管，每离心管装1ml；1.4)高速离心机上3000rpm离心1min。1.5)离心液采用微量DNA提取试剂盒进行提取并浓缩；2)PCR反应以转基因质粒和未经高压处理的收集液作为阳性对照，非转基因细胞培养液经过同样处理后作为阴性对照，以水代替DNA模板作为空白对照；PCR反应体系见表1，每个反应体系设置两个平行反应；表1 PCR反应体系3)PCR反应循环参数离心10s后，将PCR管插入PCR仪中；反应程序为：95℃变性5min；进行35次94℃变性1min，56℃退火30s，72℃延伸1min的循环扩增反应；72℃延伸7min；反应结束后取出PCR反应管，对PCR反应产物在4℃下保存待用。