可表现二蛋白质之载体

摘要

本发明系关于一种表现二蛋白质之载体，其包括一第一启动子，其可以连接第一融合蛋白编码序列，其中第一融合蛋白编码序列包括一编码为绿色萤光蛋白核苷酸序列及一第一基因多选殖点，此第一基因多选殖点系位于该编码为绿色萤光蛋白之核苷酸序列之后，用以选殖一第一多胜肽编码核苷酸序列，与该绿色萤光蛋白形成一融合。另包括一第二启动子，其可以连接第二融合蛋白编码序列，其中该第二融合蛋白编码序列包括一编码为麸胱甘肽-S-转移酶核苷酸序列及第二基因多选殖点，此第二基因多选殖点系位于该编码为麸胱甘肽-S-转移酶之核苷酸序列之后，用以选殖一第二多胜肽编码核苷酸序列，与该麸胱甘肽-S-转移酶形成一融合。此载体可同时表现二蛋白质以及包含利于挑菌之氨苄青霉素抗性基因，可增加蛋白质体学领域试验之便利性及可利用性。

主权项

一种表现载体，其核苷酸序列系为序列识别号：1，该表现载体包含：一第一启动子，其连接一第一融合蛋白编码序列，其中该第一融合蛋白编码序列包括一编码为一绿色萤光蛋白(GFP)之核苷酸序列及一第一基因多选殖点；该第一基因多选殖点系位于该编码为该绿色萤光蛋白之核苷酸序列下游，用以选殖一第一多胜肽编码核苷酸序列，与该绿色萤光蛋白形成一融合；一第二启动子，其连接一第二融合蛋白编码序列，其中该第二融合蛋白编码序列包括一编码为一麸胱甘肽-S-转移酶(GST)之核苷酸序列及一第二基因多选殖点；该第二基因多选殖点系位于该编码为该麸胱甘肽-S-转移酶之核苷酸序列下游，用以选殖一第二多胜肽编码核苷酸序列，与该麸胱甘肽-S-转移酶形成一融合；一细菌筛选标记(selection marker)，其系为氨苄青霉素(ampicillin)抗性基因；以及一哺乳动物筛选标记；其中，该第一启动子及该第二启动子系选自于由巨细胞病毒启动子及人类延长因子-1α启动子所组成之群组；其中，该表现载体系利用一i>Mlu/i>I及一i>Rsr/i>II限制酶切点所黏合。如申请专利范围第1项所述之表现载体，其中该麸胱甘肽-S-转移酶基因序列包括序列识别号：4。如申请专利范围第1项所述之表现载体，其中该绿色萤光蛋白基因序列包括序列识别号：5。一种可分离之细胞，其包含如申请专利范围第1项至第3项之任一项所述之表现载体。一种利用如申请专利范围第1项至第3项之任一项所述之表现载体表现二蛋白质之方法，其步骤包含：将一编码为一第一蛋白质之核苷酸序列选殖入一表现载体，其中该表现载体包括一连接于一第一融合蛋白编码序列之第一启动子，其中该第一融合蛋白编码序列包括一编码为一绿色萤光蛋白之核苷酸序列及一第一基因多选殖点；该第一基因多选殖点系位于该编码为该绿色萤光蛋白之核苷酸序列下游，用以选殖该编码为该第一蛋白质之核苷酸序列，与该绿色萤光蛋白形成一融合；将一编码为一第二蛋白质之核苷酸序列选殖入该表现载体，该表现载体包括一连接于一第二融合蛋白编码序列之第二启动子，其中该第二融合蛋白编码序列包括一编码为一麸胱甘肽-S-转移酶之核苷酸序列及一第二基因多选殖点；该第二基因多选殖点系位于该编码为该麸胱甘肽-S-转移酶之核苷酸序列下游，用以选殖该编码为该第二蛋白质之核苷酸序列，与该麸胱甘肽-S-转移酶形成一融合；以及将该表现载体转移入一表现系统内。如申请专利范围第5项所述之方法，其中该表现载体系经由转染或转化作用送入至一细胞内。如申请专利范围第6项所述之方法，其中该细胞系为一哺乳动物细胞。如申请专利范围第5项所述之方法，该表现载体系添加于一无细胞之转录转译系统。一种分离一表现蛋白质之方法，其步骤包含：将如申请专利范围第1项所述之载体引入一细胞内；培养具有如申请专利范围第1项所述之载体之该细胞；以及将该蛋白质自细胞内分离出来。一种用以建构一具表现二蛋白质之载体之套组，其包含：如申请专利范围第1项所述之载体；以及一引子，其系在一聚合酶连锁反应中，用以筛选任一位于基因多选殖点之一嵌入的存在；其中，该引子系选自由序列识别号：6及序列识别号：7所构成的群组之中。一种用以检测一表现载体中之蛋白表现之套组，其包含：如申请专利范围第1项所述之载体；以及一抗体，其系用于如申请专利范围第1项所述之载体所表现出之蛋白；其中，该抗体系选自由抗麸胱甘肽-S-转移酶之抗体及抗绿色萤光蛋白之抗体所组成之群组。一种用于双杂交筛选之载体，其包含：如申请专利范围第1项所述之载体，其中以一编码为一引诱蛋白(bait protein)之核苷酸序列取代该绿色萤光蛋白核苷酸序列，另以一编码为一捕获蛋白(prey protein)之核苷酸序列取代该麸胱甘肽-S-转移酶核苷酸序列；或其中以一编码为一捕获蛋白之核苷酸序列取代该绿色萤光蛋白核苷酸序列，另以一编码为一引诱蛋白之核苷酸序列取代该麸胱甘肽-S-转移酶核苷酸序列。