使用阻断性寡核苷酸进行DNA扩增的方法

摘要

本发明涉及用于从核酸样品选择性扩增靶DNA序列的体外方法，所述方法包括对怀疑包含至少一个靶DNA序列的核酸样品运行PCR扩增，所述靶DNA序列与参比DNA序列在至少一个预定靶突变位点处不同；其中所述方法利用了阻断性寡核苷酸，其除了所述靶突变位点外部的至少一个错配之外，与包含所述靶突变位点的所述参比DNA序列的一部分互补。

主权项

一种用于从核酸样品选择性扩增靶DNA序列的体外方法，所述方法包括：a.提供怀疑包含至少一个靶DNA序列的核酸样品，所述靶DNA序列与参比DNA序列在至少一个靶突变位点处不同；b.添加以下物质以便形成反应混合物：i)正向引物寡核苷酸和反向引物寡核苷酸，其与所述靶突变位点周围的所述参比DNA序列的一部分完全互补，ii)阻断性寡核苷酸，其被设计成与所述引物寡核苷酸之一竞争，并被修饰以使其不能被聚合酶延伸；c.通过聚合酶链反应(PCR)对所述反应混合物进行扩增，由此延伸所述引物寡核苷酸以便选择性扩增所述靶DNA序列；其中所述方法的特征在于所述阻断性寡核苷酸与包含所述靶突变位点的所述参比DNA序列的一部分互补，但是在所述靶突变位点的外部包含至少一个与所述参比DNA序列的错配。