哺乳动物细胞高效电转染缓冲液及其制备方法

摘要

本发明公开了哺乳动物细胞高效电转染缓冲液，该缓冲液是对Cytomix缓冲液的进一步改良。该缓冲液中加入的无血清Opti-MEM培养基、RPMI-1640培养基及PBS缓冲液能对细胞起营养保护作用，能增加细胞存活率，同时加入的ATP和谷氨酰胺可阻止细胞质成分渗漏，加强细胞膜抗氧化作用，有利于电穿孔的重新闭合。本发明公开的电转染缓冲液，能够明显提高外源基因在目标细胞的电转染效率（高达64.82%），并能提高细胞存活率（高达62.33%）。本发明还提供了该电转染缓冲液的制备方法，该方法操作简单，可操作性强。

主权项

哺乳动物细胞高效电转染缓冲液及其制备方法，其特征在于该方法的工艺步骤如下：（1）称取8.94g KCl、0.01665g CaCl₂、1.74 g K₂HPO₄、0.475g MgCl₂，加入无菌水定容至1升，混合得到Cytosalts溶液；（2）取50‑100份步骤（1）得到的Cytosalts溶液，加入10‑25份Opti‑MEM培养基，得到混合体系A；（3）取1‑5份RPMI‑1640培养基加入到步骤（2）得到的混合体系A中，得到混合体系B；（4）取1‑5份PBS缓冲液加入到步骤（3）得到的混合体系B中，得到混合体系C；（5）取1‑10份浓度为25 mmol/ L、pH值为7.6 的HEPES加入到步骤（4）得到的混合体系C中，得到混合体系D；（6）取1‑10份浓度为2 mmol/ L ATP加入到步骤（5）得到的混合体系D中，得到混合体系E；（7）取1‑10份浓度为5 mmol/ L谷胱苷肽加入到步骤（6）得到的混合体系E中，混合均匀，过滤除菌，得到电转染缓冲液；以上所加物料的份数均为体积份。