实时荧光恒温指数扩增方法

摘要

本发明提供了一种实时荧光恒温指数扩增方法，使用荧光标记的“茎-环-尾”结构寡核苷酸信号扩增模板，或者荧光标记的单纯线性结构寡核苷酸信号扩增模板，能够在恒定温度条件下，在具有切割双链核酸分子中一条链的缺口剂和具有链替换活性的DNA聚合酶共同作用下，重复进行“切割-延伸-链置换”过程，以指数形式扩增靶分子特异性寡核苷酸且能释放荧光信号。通过不同靶分子特异性寡核苷酸对应的信号扩增模板释放的荧光信号种类和丰度，可在单个反应管、检测池或检测孔中实现多个靶分子的平行检测，靶分子特异性寡核苷酸扩增10⁶倍以上，能够有效解决现有恒温扩增技术无法在单个检测体系中同时检测多种靶分子的技术难题。

主权项

实时荧光恒温指数扩增方法，其特征在于：反应混合物包括以下反应成分：具有3'‑OH，具有核酸靶分子特异性的靶分子特异性寡核苷酸；标记有荧光报告基团和荧光淬灭基团且具有缺口剂识别序列的信号扩增模板寡核苷酸；DNA聚合酶；识别信号扩增模板寡核苷酸缺口剂识别序列的缺口剂；三磷酸脱氧核苷酸；满足上述DNA聚合酶和缺口剂生物学活性功能的离子与缓冲体系；所述反应混合物于恒温条件下反应。