一种葡聚糖的夹心酶联免疫吸附测定方法

摘要

一种葡聚糖的夹心酶联免疫吸附测定方法，涉及葡聚糖。1)酶标反应板的包被；2)酶标反应板的封闭；3)加检测样品；4)加酶标二抗；5)加底物显色；6)终止反应；7)OD值的测定。杂交瘤细胞株D9保藏编号为CCTCC NO：C2010107。基于抗葡聚糖单克隆抗体建立的夹心酶联免疫吸附测定方法，可定量检测样本中的葡聚糖，具有特异性强、灵敏度高、快速简便易于操作、对仪器的要求低等优点，更能适应大规模样品检测的需要。

主权项

一种葡聚糖的夹心酶联免疫吸附测定方法，其特征在于包括以下步骤：1)酶标反应板的包被，具体方法为：取葡聚糖单克隆抗体杂交瘤细胞株D9包被96孔酶标板，100μL/孔，同时设置阴性对照孔和空白孔，4℃过夜；2)酶标反应板的封闭，具体方法为：用洗涤液洗涤酶标板，拍干，加封闭液，37℃孵育；3)加检测样品，具体方法为：用洗涤液洗涤酶标板，拍干，加入Dextran 2000标准品或样品溶液，100μL/孔，同时设标准品零值孔、阴性孔，每个样品设3个复孔，37℃反应；4)加酶标二抗，具体方法为：用洗涤液洗涤酶标板，拍干，加入D24酶标抗体，37℃温育；5)加底物显色，具体方法为：用洗涤液洗涤酶标板，拍干，加入显色OPD溶液，37℃温育；6)终止反应，具体方法为：每孔加入50μL H₂SO₄溶液终止反应；7)OD值的测定，具体方法为：用酶标仪测定，以空白孔调零，在A490波长测定样品和阴性对照的OD值，完成葡聚糖的夹心酶联免疫吸附测定。