发明名称 |
一种猴子早期胚胎转基因敲入的PCR鉴定方法 |
摘要 |
本发明属于分子生物学及基因工程领域,涉及一种猴子早期胚胎转基因敲入的PCR鉴定方法。含有0.2-0.5µl培养基的单个注射完的早期胚胎收集于薄壁透明PCR管底部;用枪头小心加入DLB裂解液5µl至PCR管底部,不要接触到含有胚胎的培养基;置于冰上裂解15-30min释放基因组DNA;裂解产物直接全部用于全基因组扩增反应;然后用两轮巢式PCR扩增方法进行转基因敲入鉴定。本发明的方法能稳定地对少至只有16个细胞的猴子单个胚胎进行操作,所有操作步骤一直在同一PCR管中操作,防止操作过程造成微量基因组的丢失。同时,高保真横向扩增的方法拓展了基因组的下游应用,按照此方法可稳定、准确、简便地实现对猴子单个胚胎基因组敲入的快速PCR鉴定。 |
申请公布号 |
CN105132535A |
申请公布日期 |
2015.12.09 |
申请号 |
CN201510469573.3 |
申请日期 |
2015.08.04 |
申请人 |
福州大学 |
发明人 |
陈文锋;杨宇丰;孙玲 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
福州元创专利商标代理有限公司 35100 |
代理人 |
蔡学俊 |
主权项 |
一种猴子早期胚胎转基因敲入的PCR鉴定方法,其特征在于:含有0.2‑0.5µl培养基的单个注射完的早期胚胎收集于薄壁透明PCR管底部;用枪头小心加入DLB裂解液5 µl至PCR管底部,不要接触到含有胚胎的培养基; 置于冰上裂解15‑30min释放基因组DNA; 裂解产物直接全部用于全基因组扩增反应。 |
地址 |
350108 福建省福州市闽侯县上街镇大学城学园路2号福州大学新区 |