一种以川贝母根为外植体的川贝母愈伤组织的培养方法

摘要

本发明公开了一种以川贝母根为外植体的川贝母愈伤组织的培养方法，该方法以川贝母根尖为外植体成功诱导出有效组份含量高的川贝母愈伤组织，并完成了川贝母愈伤组织的快速增殖培养，该方法不仅为利用生物技术大规模生产川贝母有效成分提供了一种新途径，也可在一定程度上解决川贝母药材资源短缺的问题，满足药材市场对川贝母有效组份的需求。

主权项

一种以川贝母根为外植体的川贝母愈伤组织的培养方法，其特征在于包括如下步骤：(1)外植体的选择和消毒处理：切取生长二年以上的川贝母植株上的根，先用浓度为0.02％～0.05％的升汞溶液冲洗干净，然后置于15～20℃的条件下阴干3～6小时，再在超净台上，用配制的升汞溶液消毒处理3～6min，所述配制的升汞溶液是按每100ml浓度为0.1％升汞溶液中滴加0.5～1.0ml浓度为0.3～0.5％的聚乙二醇辛基苯基醚溶液配制的；(2)愈伤组织的诱导培养：切取步骤(1)中已消毒的川贝母根尖0.5～2cm的长度，接入改良的MS+2‑ip 0.5～1.5mg·L^‑1+NAA 0.3～1.0mg·L^‑1+头孢曲松钠200～500mg·L^‑1+香蕉汁100～300mg·L^‑1的愈伤组织诱导培养基中，在温度为10～18℃、每天光照4～10小时和光照强度为1500～2000lx的条件下进行培养，所述改良的MS为硝酸铵含量减半的MS基本培养基；(3)愈伤组织的增殖培养：选取步骤(2)中培养的质地较紧密和颜色为白色的愈伤组织，切成0.3～1.0cm³的大小后转接入B5+2,4‑D 1.0～4.0mg·L^‑1+KT 0.1～1.0mg·L^‑1+多效唑0.5～2.0mg·L^‑1+活性炭1.0～2.0mg·L^‑1的增殖培养基中，在温度为15～22℃、每天光照2～5小时和光照强度为300～600lx的条件下进行愈伤组织的增殖培养；上述所有培养基的pH值为5.6～6.5、蔗糖35～45g·L^‑1、琼脂5.0～6.0g·L^‑1。