一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法

摘要

本发明公开了一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法，采用以下步骤：1）将鱼肌肉溶于10mMTris-Hcl溶液中,组织捣碎后，离心取上清液；2）将上清液于沸水浴中加热，4℃离心取上清液；3）往上清液中加入10mM Cacl₂及100mM PMSF，4℃离心两次，取上清液；4）往上清液中缓慢加入TCA溶液；5）将溶液在4℃缓慢搅拌，加NaOH溶液调PH；6）将溶液在4℃缓慢搅拌，上清液离心，得沉淀物；7）重复步骤4-6得纯化后的小清蛋白。本发明采用沸水浴加热，两次TCA提取方法纯化鱼类的小清蛋白，纯化工艺简单、过程快速、设备要求较低、易操作，可得较纯的小清蛋白，可操作性强，便于推广应用。

主权项

一种鱼类过敏原小清蛋白的快速纯化方法，其特征在于采用以下步骤：1）将鱼肌肉加入10mM　Tris‑HCl溶液中,组织捣碎后，4℃离心取上清液；所述鱼肉和Tris‑HCl溶液质量体积比为1：5；离心转速为8000r/min，时间为15min；2）将所得的上清液于沸水浴中加热15min，4℃离心后取上清液；离心的转速为12000r/min，时间为20min；3）往步骤2）所得的上清液中加入10mM CaCl₂及100mM PMSF，4℃离心两次，取上清液；离心转速为10000r/min，时间为20min；4）往步骤3）制得的上清液中缓慢加入TCA溶液，得TCA混合溶液；5）将步骤4）制得的TCA混合溶液在4℃缓慢搅拌，边搅拌边加入NaOH溶液调节PH=5.2；6）将步骤5）制得的溶液在4℃缓慢搅拌，得到的上清液于4℃离心，弃去上清液，得小清蛋白沉淀物；搅拌时间为1h，离心转速为8000r/min，时间为20min；7）将小清蛋白沉淀物加少量蒸馏水完全溶解后，往蒸馏水溶液中缓慢添加TCA溶液混匀得TCA混合溶液，然后在4℃缓慢搅拌10min，边搅拌边加入NaOH溶液调节PH=5.2，得混合溶液，在温度不变的条件下搅拌混合溶液1h后离心，在转速为8000r/min离心20min，弃去上清液，将得到的沉淀经真空干燥机干燥后于‑80℃冷冻，得到纯化的小清蛋白。