一种ENU诱导草鱼基因组DNA中基因突变的化学方法

摘要

本发明涉及一种ENU在草鱼基因组DNA中诱发基因突变的化学方法，所述的ENU作为诱导剂诱变草鱼胚胎处理浓度为0.1~0.5mM；精子诱导处理浓度为0.5~10mM本发明还提供了ENU工作液在诱导草鱼基因DNA突变中的应用。本发明优点在于：采用ENU化学诱变剂浸泡受精卵和处理精子的方法均能产生一定比例发育正常、快速生长的个体，该方法可成功用于草鱼的育种工作，大大缩短草鱼的育种周期。

主权项

一种在草鱼基因组DNA中利用ENU 作为诱导剂诱发基因突变的化学方法，其特征在于：ENU作为诱导剂诱变草鱼胚胎的方法的步骤为：对草鱼进行催产和人工授精，受精卵用孵化水室温孵化，在草鱼受精卵还处于0‑1细胞期时，滤出受精卵，放于ENU工作液中浸泡，之后倒出工作液，用孵化水清洗受精卵，将清洗好的受精卵进行孵化，所述的ENU工作液浓度为0.1~0.5 mM；ENU工作液的配制方法：将0.1 g ENU溶解于8.5 ml浓度为10 mM的NaOAc溶液中，配成0.1 M的ENU母液，使用前，用改进的Hanks溶液稀释；改进的Hanks溶液的配制方法：0.4 g KCl、8 g NaCl、0.35 g NaHCO₃、0.09 g NaH₂PO₄·7H₂O、0.1 g MgSO₄·7H₂O、0.1 g MgCl₂·6H₂O、0.06 g KH₂PO₄、0.14 g CaCl₂和1 g葡萄糖加入1 L无菌重蒸水中。