一种铂基合金标记的三通道夹心型免疫传感器的制备方法及应用

摘要

本发明属于纳米功能材料、免疫分析及生物传感技术领域，提供了一种铂基合金为标记物的三通道夹心型免疫传感器制备方法及应用。掺杂一些非贵金属合金，可以降低Pt的负载量，从而减少成本。利用Pt良好的生物相容性，以及另一种非贵金属的电活性，可以从另一方面作为标记物构建电化学免疫传感器，实现对三种分析物的同时检测，并具有较高的灵敏度。

主权项

一种铂基合金标记的三通道夹心型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）铂基合金纳米材料的制备分别向三份已除氧超纯水配制的50 mL、0.2~0.3 mmol/L柠檬酸水溶液中，依次加入0.05~0.15 mmol的H₂PtCl₄和0.015~0.035 mmol的氯化物溶液，氯化物选自ZnCl₂或CdCl₂或CuCl₂，再分别加入2 mmol的NaBH₄，溶液产生大量气泡，继续搅拌2 h，制得黑色铂基合金纳米材料PtZn、PtCd和PtCu，用超纯水清洗，干燥备用；（2）三种铂基合金标记的分析物检测抗体孵化物的制备称取1.0~3.0 mg铂基合金纳米材料PtZn、PtCd和PtCu，分散在0.5 mL、pH=7.4的PBS中，分别加入8~12 μg的分析物a检测抗体、分析物b检测抗体和分析物c检测抗体，4 ℃下孵化12 h，制得三种铂基合金标记的分析物检测抗体孵化物，通过离心分离除掉未结合的抗体后，将其分散在1 mL、质量分数为0.1% BSA的PBS中，置于4 ℃冰箱备用；所述铂基合金标记的分析物a检测抗体孵化物为PtZn/a‑Ab；所述铂基合金标记的分析物b检测抗体孵化物为PtCd/b‑Ab；所述铂基合金标记的分析物c检测抗体孵化物为PtCu/c‑Ab；（3）将玻碳电极依次用0.1 µm、0.05 µm的氧化铝粉末打磨抛光，然后用超纯水冲洗，除掉表面的杂质，完成玻碳工作电极的预处理；（4）将3~5 μL、1.0~3.0 mg/mL的Pt‑石墨烯水溶液超声处理分散均匀，然后滴涂在玻碳工作电极表面，自然晾干；（5）依次将3~5 µL、8~12 µg/mL 分析物a的捕获抗体、分析物b的捕获抗体和分析物c的捕获抗体，分别滴涂到工作电极表面，4 ℃冰箱中干燥；（6）滴涂2~4 µL、质量分数为1%的牛血清白蛋白于工作电极表面，置于4 ℃冰箱中直至干燥，超纯水清洗后，置于4℃冰箱中晾干；（7）分别滴加不同浓度的分析物a、分析物b和分析物c于工作电极表面；（8）取3~5 µL三种铂基合金标记的分析物检测抗体孵化物，分别滴涂于电极表面上，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一种铂基合金标记的三通道夹心型免疫传感器。