一种高效提取摇蚊幼虫DNA的方法

摘要

本发明公开了一种高效提取摇蚊幼虫DNA的方法，它是取单只摇蚊幼虫，用解剖针尽可能将其肠道全部拉出弃掉，用蒸馏水浸泡虫体，将所得幼虫放置1.5mlEp管内，加裂解液，用研磨棒对幼虫进行研磨，研磨充分。再加入20ul蛋白酶K和15ulRNA酶，混匀，置于56℃水浴锅中进行过夜消化处理。氯仿、异戊醇抽提两次。再加300μl饱和酚、300μl氯仿：异戊醇抽提一次。最后加0.5体积异丙醇冰上沉淀。再经过70%乙醇洗涤后，烘箱37℃烘干，加30ulddH₂O（37℃）对DNA进行溶解。采用本发明能够获得摇蚊幼虫高质量DNA，可直接用于PCR反应扩增COI基因。

主权项

一种高效提取摇蚊幼虫DNA的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）增加预处理：取单只摇蚊幼虫，用解剖针尽可能将其肠道全部拉出弃掉，防止肠道内消化物对后续实验造成干扰；用蒸馏水浸泡虫体，每5 min换一次蒸馏水，换两次共计15 min，以去除虫体上的杂质；（2）将（1）所得幼虫放置1.5 ml Ep管内，加裂解液，用研磨棒对幼虫进行研磨，研磨充分；（3）加入20 ul蛋白酶K和15 ul RNA酶，混匀，置于56℃水浴锅中进行过夜消化处理；（4）按体积比24:1的氯仿：异戊醇抽提两次；（5）加300 μl饱和酚、300 μl氯仿：异戊醇抽提一次；（6）加0.5体积异丙醇冰上沉淀；（7）70%乙醇洗涤两次；（8）烘箱37℃烘干，加30 ul ddH₂O（37℃）对DNA进行溶解。