一种分步酶解发病异育银鲫制备不同分子量段抗氧化肽粉的方法

摘要

本发明涉及一种分步酶解发病异育银鲫制备不同分子量段抗氧化肽粉的方法，包括：经过去除下脚料部位、分段、紫外初步灭活病毒和细菌、正丁醇脱脂、分步酶解、高温进一步灭活病毒和细菌、上清液硫酸铵盐析、缓冲液复溶、活性炭脱腥、超滤板分段、脱盐、旋蒸浓缩和冷冻干燥的方法制备得到不同分子量段抗氧化肽粉。本发明利用发病异育银鲫制备具有高活性的抗氧化肽粉，不仅可以解决发病异育银鲫蛋白质资源浪费及环境污染问题，而且可以变废为宝减少养殖户的损失，具有良好的应用前景。

主权项

一种分步酶解发病异育银鲫制备不同分子量段抗氧化肽粉的方法，包括：(1)将发病异育银鲫去鱼头、鱼鳞、鱼皮及内脏，并将剩余的鱼身部分切段；将得到的鱼段在室温下于紫外灯下照射20‑30min，以初步灭活病毒及细菌；(2)将初步灭活病毒及细菌的鱼段按质量体积比1:20～30置于正丁醇中，于4～8℃下不断搅拌对鱼段进行脱脂24～32h，冲洗干净，最后用纯水浸泡；(3)按质量体积比1g:3～5ml向鱼段中加入水，调节pH至7.0～8.0，并按鱼段质量的1～2％加入风味蛋白酶，加热至40～60℃，在搅拌的条件下酶解1‑2h；随后调节酶解液pH至6.5～7.0，并按鱼段质量的0.5～1％加入菠萝蛋白酶，加热至45～50℃，在搅拌的条件下酶解1‑2h；(4)酶解完毕后于沸水浴中煮15‑20min灭活蛋白酶及进一步灭活病毒和细菌，离心，收集上清液；(5)于冰水浴条件下向步骤(4)的上清液中加入研磨细碎的硫酸铵至饱和度为85～88％，搅拌待硫酸铵溶解完全后，置于4～6℃过夜盐析；(6)盐析后离心，收集沉淀，用磷酸盐缓冲液复溶，得到复溶液；按体积向复溶液中加入0.5～1％的活性炭，于35～40℃下搅拌脱腥，离心，收集上清液；(7)用截留分子量不同的超滤板于4～6℃下将步骤(6)的上清液分成#>10kDa、10kDa>#>5kDa、5kDa>#>3kDa和#>3kDa四段；将各段上清液于4～6℃透析脱盐，旋蒸浓缩，最后冷冻干燥制得不同分子量段抗氧化肽粉。