粗毛韧革菌菌体在制备银杏内酯B中的应用

摘要

本发明公开了粗毛韧革菌菌体在制备银杏内酯B中的应用，本发明通过对粗毛韧革菌菌种进行扩大培养，从试管斜面、液体摇瓶、种子培养和菌体分离，利用菌体作为催化剂，转化银杏内酯合成银杏内酯B，转化液经过离心、乙酸乙酯萃取、无水酒精结晶把银杏内酯B从发酵液分离出来。利用该方法所得到的银杏内酯B的纯度≥99％，银杏内酯转化率>90％。

主权项

粗毛韧革菌菌体在制备银杏内酯B中的应用，其特征在于粗毛韧革菌通过液体摇瓶培养、种子罐培养和菌体转化银杏内酯，分离提取得到银杏内酯B；其中所述的液体摇瓶种子培养基组成为，单位为克/升：葡萄糖5～40，玉米粉5～25，蛋白胨1～20，KH₂PO₄1～6，MgSO₄1～4，加水至适当体积，起始pH值为5.0～8.0，100～140℃灭菌20～60分钟；其中所述的种子罐培养基组成为，单位为克/升：葡萄糖5～40，玉米粉5～25，蛋白胨1～10，KH₂PO₄1～6，MgSO₄1～4，消泡剂0.1～0.8，加水至适当体积，起始pH值为5.0～8.0，100～140℃灭菌20～60分钟；其中所述转化银杏内酯反应液组成为，单位为克/升：银杏内酯10～50，起始pH值为5.0～8.0；其中所述的摇瓶培养的培养条件是：250mL三角瓶装液量为60～150mL，接种3～4块4×4mm小块菌种，置于温度22～30℃，转速120～160转/分钟，培养时间24～48小时；其中所述种子罐的培养条件是：接种量5～10种子液体积/接种后体积％，培养温度22～30℃，搅拌速率90～150转/分钟，通风量1∶0.3～1v/v/m，培养时间80～90小时；其中所述的转化工艺条件是：种子液4000～6000转/分钟，离心5～20分钟，收集菌体，菌体与转化银杏内酯反应液按重量体积比1∶5～50混匀，在温度22～30℃，搅拌速率90～150转/分钟，通风量1∶0.3～1v/v/m，转化6～18小时；按照该转化工艺，其中在进行摇瓶培养之前，首先将粗毛韧革菌的斜面菌种接入新配制的马铃薯葡萄糖培养基中进行传代培养，培养温度22～30℃，培养时间24～248小时。