一种猪流行性腹泻重组杆状病毒基因工程亚单位疫苗及其制备方法与应用

摘要

本发明属于生物疫苗制备技术领域，具体涉及一种猪流行性腹泻重组杆状病毒基因工程亚单位疫苗及其制备方法与应用。本发明选取当前PEDV新流行毒株的S1基因和M基因为参考序列，采用杆状病毒表达系统表达S1蛋白或部分S1蛋白和M蛋白，将获得的重组蛋白制备成亚单位疫苗，用于有效控制猪流行性腹泻的发生。本发明所述方法制得的猪流行性腹泻基因工程亚单位疫苗解决了目前猪流行性腹泻病毒传统疫苗存在的缺陷，可用于预防和治疗猪流行性腹泻病毒感染及其引起的相关疾病，也同样适用于制备检测猪流行性腹泻病毒抗体ELISA试剂盒的包被抗原。

主权项

一种猪流行性腹泻重组杆状病毒基因工程亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.将猪流行性腹泻病毒的部分S1蛋白的编码基因S1p和完整M蛋白的编码基因克隆到杆状病毒表达系统中得到重组杆状病毒Bv‑S1p‑M；S2.将重组杆状病毒进行扩大培养，纯化回收获得S1p蛋白和M蛋白；S3.将S1p蛋白和M蛋白与药学上可接受的佐剂充分混匀后即可获得组杆状病毒基因工程亚单位疫苗；其中猪流行性腹泻病毒的部分S1蛋白的编码基因S1p的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；S3所述佐剂为油乳佐剂；S1所述重组杆状病毒Bv‑S1p‑M的构建方法为：将猪流行性腹泻病毒的部分S1蛋白的编码基因S1p和完整M蛋白的编码基因克隆到杆状病毒转移载体pFastbac‑Dual中，得重组载体pFastbac‑Dual‑S1p‑M；重组载体pFastbac‑Dual‑S1p‑M转化到预含有杆状病毒骨架质粒的DH10Bac感受态细胞中，通过同源重组后提取重组载体，重组载体再转染Sf9细胞产生重组杆状病毒。