产纤维素酶的突变菌株、高效表达目的蛋白的突变菌株及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了产纤维素酶的基因工程菌和高效表达目的蛋白的工程菌及其构建方法与应用。本发明通过改造微生物三个β-葡萄糖苷酶基因NCU00130、NCU04952、NCU08755得双基因突变菌株BG13(NCU00130×NCU08755)、BG12(NCU00130×NCU04952)、BG23(NCU04952×NCU08755)和三基因突变菌株BG123(NCU00130×NCU04952×NCU08755)，并将其在发酵过程中添加特定诱导物纤维二糖来生产纤维素酶。此外，本发明还以三基因突变菌株BG123为父本，以组氨酸缺陷型纤维二糖水解酶双突变缺失菌株Δ2cbh::Δhis3为母本经杂交得到六基因突变菌株Δ3βG::Δ2cbh::Δhis3，并利用其生产目的蛋白。

主权项

一种高效表达目的蛋白的方法，是将携带编码蛋白功能片段的基因的重组表达载体导入六基因突变菌株Δ3βG::Δ2cbh::Δhis3，再发酵该工程菌得到目的蛋白；所述工程菌中重组表达载体中目的蛋白基因的上游还携带有疏水蛋白NCU08457开放阅读框上游的启动子序列，NCU08457启动子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.13所示；所述六基因突变菌株Δ3βG::Δ2cbh::Δhis3是敲除了野生微生物菌株中的五个基因和突变了一个组氨酸合成酶基因得到的微生物菌株；所述五个基因为三个β‑葡萄糖苷酶基因NCU00130、NCU04952和NCU08755以及两个纤维二糖水解酶基因NCU07340和NCU09680；所述野生微生物菌株为粗糙脉孢菌。